1、定義：又稱降落PCR.即選定一個溫度范圍，如50-35℃，每降1-2 ℃進行1-2個循環，然后在50度下進行15個循環。
2.原理：隨著退火溫度的降低，特異性逐步降低，但特異性條帶在溫度較高時已經擴增出來，其濃度遠遠超過非特異性條帶，隨著退火溫度的降低，特異性條帶優先被擴增。
3.選擇初始復性溫度的原則：起始復性溫度應該比引物的Tm值高出5-10度，然后每個循環遞減1-2度。
4.應用范圍：
⑴low copy of targeted DNA; ⑵ RT-PCR using oligo-dT;
⑶ high degree degeneracy (or less specific) of the first set of primers.