圖 4Qubit 結果顯示： 三種保存管 7 天內保存效果無明顯差異， 14 天時， K 組與 S 組保存管均出現明顯的上升，分別是第 0 天的 15.27 倍和 10.21 倍， 21 天時，上升最為明顯，分別是第 0天的 22.46 倍和 13.84 倍。 B 組保護劑保存的血液在第 0、 3、 7、 14、 21、 28 天檢測時， 每毫升血液 cf-DNA 濃度均無明顯的上升。
圖 5Beta-actin 絕對定量結果與圖 4 基本一致。 B2 組保護劑保存的血液在第 0、 3、 7、 14、21、 28 天檢測時， 每毫升血液 Beta-actin 拷貝數均無明顯的上升。
3.2 不同天數下（4°C）游離核酸保存效果的對比
圖 6Qubit 結果顯示： 在 4°C 情況下， 三種保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA 濃度并無明顯的差異。
圖 7Beta-actin 結果顯示：在 4°C 情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷貝數并無明顯的差異。
3.3 不同天數下（37°C）游離核酸保存效果的對比
圖 8Qubit 結果顯示：在 37°C 情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA 濃度并無明顯的差異。
圖 9Beta-actin 結果顯示：在 37°C 情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin拷貝數并無明顯的差異。
3.4 運輸環境（25°C）對游離核酸保存效果的影響
考慮到保存管有可能應用于樣品的長途或短途運輸，因此需用搖床模擬運輸環境對保護劑抑制細胞破裂的影響。 S 組、 K 組及 B 組分別采集血液一份，搖床設置 180rpm， 25°C，分別在 0、 3、 7、 14 天檢測核酸濃度和 beta-actin 拷貝量。
圖 10Qubit 結果顯示：在 25°C 模擬震蕩情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 cf-DNA濃度并無明顯的差異。
圖 11Beta-actin 結果顯示：在 25°C 模擬震蕩情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液Beta-actin 拷貝數并無明顯的差異。
4.討論
（1）從每毫升血液 Beta-actin拷貝數及每毫升血液 cf-DNA濃度兩個方面來驗證 cf-DNA完整性，已在多篇文獻中[4][5]得到驗證。
（2） 室溫 25°C 下，保存 3 天時， 3 種保存管的差異不顯著；保存第 7 天時， E 與 B 組間的差異極顯著， B 與 S
組差異具有顯著性；保存第 14 天時， B 與 S 組 P value<0.01，差異極顯著。 在室溫 25°C 下， B 組較 S 組及
E 組，保存時間較長，效果較佳。
（3）室溫 25°C 下，三種保存管 7 天內保存效果無明顯差異， 14 天時， K 組與 S 組保存管均出現明顯的上升，， 21
天時，上升最明顯。 B 組保護劑保存的血液在第 0、 3、 7、 14、 21、 28 天檢測時，每毫升血液 cf-DNA 濃度均無明顯的上升。
在室溫 25°C 下， B 組較 S 組及 K 組，保存時間較長，效果較佳。
（4）在 4°C 情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷貝數及每毫升血液 cf-DNA濃度并無明顯的差異。 在 4°C 下， B 組、 S 組及 K 組，保存效果無明顯差異。
（5）在 37°C 情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷貝數及每毫升血液 cf-DNA濃度并無明顯的差異。 在 37°C 下， B 組、 S 組及 K 組，保存效果無明顯差異。
（6） 在 25°C 模擬震蕩情況下，三種保存管 0-14 天的每毫升血液 Beta-actin 拷貝數及每毫升血液cf-DNA 濃度并無明顯的差異。 在 25°C 模擬震蕩情況下， B 組、 S 組及 K 組，保存效果無明顯差異。
5.參考文獻
[1]MANDEL P, MéTAIS P. Les acides nucléiques du plasma sanguin chez l’homme ［J］ . C R Acad Sci Paris, 1948,142: 241-243.
[2]LEON S A, SHAPIRO B, SKLAROFF D M, et al. Free DNA in the serum of
cancer patients and the effect of therapy ［J］ .Cancer Res, 1977, 37(3):
646-750.
[3]STROUN M, ANKER P, MAURICE P, et al. Neoplastic characteristics of
the DNA found in the plasma of cancer patients［J］ . Oncology, 1989,
46(5): 318-322.
[4]Norton S E, Lechner J M, Williams T, et al. A stabilizing reagent
prevents cell-free DNA contamination by cellular DNA in plasma during
blood sample storage and shipping as determined by digital PCR[J].
Clinical Biochemistry, 2013, 46(15):1561-5.
[5] Ryan W L, Fernando R M, Das K. BLOOD COLLECTION DEVICE FOR STABILIZING CELL-FREE PLASMA DNA:, WO 2013123030 A3[P]. 2013.