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    發布時間:2019-03-30 15:21 原文鏈接: 乙酰膽堿酯酶的測定實驗

    實驗方法原理

    乙酰膽堿水解酶(AChE)

    乙酰膽堿+H2O → 膽堿+乙酸

    實驗材料

    乙酰膽堿酯酶

    試劑、試劑盒

    磷酸鉀氯化乙酰膽堿白明膠氫氧化鈉

    實驗步驟



    空白對照:保持 pH 7.4,持續記錄幾分鐘每次 0.01 mol/L 氫氧化鈉的用量。


    樣品:加入酶溶液(例如 0.1~1 ml),保持 pH 7.0,并記錄 5 min 每次 0.01 mol/L 氫氧化鈉的用量。


    計算 25℃ pH 7.4 時,每分鐘一個單位水解的 1 umol 乙酰膽堿。

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    注意事項
    其他

    試劑:


    0.02 mol/L 磷酸鉀,pH 7.0


    0.005 mol/L 氯化乙酰膽堿(Mr=181.7;91 mg 溶于 100 ml 水中)


    0.01% 白明膠,包括 0.2 mol/L 氯化鈉和 0.04 mol/L 氯化鈉(0.1 g 白明膠,11.7 g NaCl,8.1 g MgCl2· 6 H2O 溶于 1 L H2O)


    0.01 mol/L 氫氧化鈉標準溶液作為滴定劑,加入自動滴定器的滴管中


    乙酰膽喊酯酶,用 0.02 mol/L 磷酸鉀 pH 7.0 稀釋到約 20 U/ml


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