乳腺干細胞的培養實驗

組織標本

無菌DMEM F12 50:50 加人1.2 mg ml重碳酸鹽CMD3培養基膠原酶 900 IU mlVitrogen解剖刀培養瓶 25cm2Vitrogen包被 8μg cm2

搖床離心管

(a)手術后，立即將組織標本轉移至DMEM/F12(1:1)。

(b)用兩把解剖刀（每只手一把）將組織剪成約2 mm的小塊。

(c)置搖床上（60 r/min)，37℃,膠原酶消化24?48h。

(d)離心消化物數秒鐘，175g，脂肪和富含脂質的細胞漂浮于上清液的上方，將其棄去；上清液中主要含有血管來源的小粒和單個細胞；沉淀中含有血管和上皮來源的較大組織樣顆粒。

(e)用10ml DMEM/F12重懸沉淀。在30s內，上皮來源的組織樣大顆粒會沉淀，血管來源部分則懸浮于培養基中。因為它們最終也會沉淀下來，所以應該同上皮來源的組織樣大顆粒分離。通常，再經過兩輪重懸沉淀，就可以將上皮來源的組織樣大顆粒與血管分離。

(f)離心d步驟中的上清液，125g,5 min。沉淀中含有小血管。棄去上清，離心，500g,10 min,則沉淀中含有成纖維細胞。

(g)將上皮來源的小粒，種植到Vitrogen包被的25cm²培養瓶中。必要時，其他部分也可種植。

(h)加人CDM3培養基，培養瓶置于37℃，5% CO₂溫箱中