需要試劑
Human Regulatory T Cell Whole Blood Staining Kit （#88-8996-40）
包含組分：
(1)、1X RBC Lysis Buffer: 200 mL
(2)、Flow Cytometry Staining Buffer: 600 mL
(3)、Fixation/Permeabilization Concentrate: 30 ml
(4)、Fixation/Permeabilization Diluent: 100 mL
(5)、Anti-Human Foxp3 PE (PCH101): 25 tests
Anti-human CD4 （標記可選）
Anti-human CD25（標記可選）
Rat IgG2a K Isotype Control PE (#12-4321-41)
推薦操作步驟
取100ul全血，加入適量Anti-human CD4和Anti-human CD25，4 ℃孵育30 分鐘（根據說明書和抗體管上的標識確定抗體用量）。按個人要求設置空白管、補償管、同型對照管和樣本管。
染色完的全血不用洗，每管加入2-3ml 1X RBC Lysis Buffer，混勻。室溫孵育10分鐘。
觀察溶液透亮后，300 -400 g離心5分鐘，去上清。
加入2-3ml Flow Cytometry Staining Buffer，300 -400 g離心5分鐘，去上清。
重復洗一次。
制備固定/破膜工作液：1份Fixation/Permeabilization Concentrate加入到3份Fixation/Permeabilization Diluent中，按樣品量現用現配，每管用量為1ml。
旋渦震蕩細胞沉淀，每管加入1ml的固定/破膜工作液（第6步配置準備的），并再次旋渦混勻。
避光4℃孵育30分鐘到60分鐘，在此時間內效果一致。
加入2-3ml Flow Cytometry Staining Buffer，300 -400 g離心5分鐘，去上清。
重復洗一次。
樣本管中加入5ul或1test的Foxp3抗體，同型對照管中加入0.25ug Rat IgG2a K Isotype Control PE，保證最終染色體積不大于100ul，避光4℃孵育30-60分鐘，根據結果優化染色時間。
加入2ml Flow Cytometry Staining Buffer洗滌細胞并棄去上清液。
用300-500ul Flow Cytometry Staining Buffer重懸細胞，并上機檢測并分析。注：由于染色過程中使用了細胞固定和破膜，對比起活細胞在形態上會有一定變化，因此FSC/SSC圖中圈門時需要做一定調整。
注：以上說明書僅供參考，具體實驗請對照廠商說明書操作。