人淋巴細胞NT3基因工程細胞的建立及鑒定

【摘要】　目的　建立能夠存活較長時間并穩定表達神經營養素- 3 (neurotrophin - 3 ,NT3) 的人淋巴細胞株,為后續的動物和人體耳蝸內基因轉染實驗奠定基礎。方法　從正常人全血中通過Ficoll 液提取人淋巴細胞,并在其完全血清培養基中加入白細胞介素- 2 ( IL - 2) 使其良好生長。通過RT - PCR 得到人胎肝組織的NT3cDNA ,以T4DNA 連接酶和真核表達載體pIRES - DsRed2 相連接。以陽離子脂質體作為載體,將pIRES - DsRed2 - NT3 轉染人淋巴細胞,進行RT- PCR 及Western Blot 分析鑒定。結果　建立了一種能使體外培養淋巴細胞成活時間延長的新方法,成功轉染NT3 基因至淋巴細胞中,并能繼續存活相對較長時間,Western Blot 證明細胞上清液中有NT3 ,構建了穩定表達NT3 的人基因工程淋巴細胞。結論　構建重組質粒pIRES - DsRed2 - NT3 ,利用淋巴細胞作為中介宿主,進而表達、分泌NT3 ,為進一步NT3 基因轉染致聾動物耳蝸實驗奠定了基礎,并有可能為人體基因轉染治療耳聾找到很好的中介細胞。