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    發布時間:2020-08-17 21:54 原文鏈接: 借電阻進行電子細胞計數

    實驗方法原理 將細胞樣品稀釋在電解質(生理鹽水或D-PBSA ) 中,然后移入帶孔管子的下部,讓0.5ml的樣品溶液流過計數器以計算其中的細胞數。

    實驗步驟

    材料

    無菌:細胞培養物、D-PBSA、0. 2 5 % 粗制胰蛋白酶、生長培養基

    非無菌:計數杯


    操作步驟


    1. 用胰酶消化單層培養的細胞,或從懸浮培養中收集樣品。充分地混勻細胞懸液使之盡量分散成單個細胞。


    2. 在一個 25m l 的燒杯或任一樣品杯中,用計數液體以 1 : 50 稀釋細胞懸液至 20m l。使用自動分散器(圖 5. 2 0 ) 會加速稀釋,會使重復性更好。

    注意事項 快速地分配計數溶液會產生氣泡,當這些氣泡通過小孔時會被當作細胞統計在內。因而計數溶液在開始計數前應靜置一會兒。如果溶液被先分配,然后再加入細胞,則出現氣泡的可能性就會很小。


    3 . 充分地混勻細胞懸液,然后移入帶孔管子的底部,確保能覆蓋住小孔,樣品杯中的外部電極應位于計數溶液的液面之下。


    4 . 檢査程序設置:


    (a) 臨界值設定(細胞大小的下限通常為 7. 0um );


    (b ) 檢測體積(通常 0.5 ml);


    (c) 背景去除(視需要而定);


    (d ) 溶解設定(例如,若 20 ml 的 D-PBSA 中有 0.4 ml 被計數,則設為 50)。


    5. 檢査可見的模擬顯示


    (a) 確保所有的細胞都在設定的臨界范圍之內;


    (b ) 檢査細胞活力或細胞碎片(通過曲線的肩部或正常臨界值下限以下的直方圖來指示)。


    (c) 檢査細胞是否聚集成團(即出現在正常大小范圍之上的顆粒)。


    6 . 啟動計數程序。


    7 . 當計數周期完成時,細胞大小的分布情況將出現在模擬顯示屏上(圖 21.4)。 轉換到數字顯示屏后就可以得到每毫升的細胞數。


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