1.使用前，將所有試劑平衡至室溫，載玻片平衡至室溫再打開。
2.樣本的稀釋：按1:1比例稀釋血清樣本，即25μl血清加入25μlPBS（磷酸鹽緩沖液）中。陰陽性對照不需要稀釋。
3. 用吸附劑處理稀釋后的血清：將30μl稀釋后的血清加入150μl吸附劑中，徹底混勻。陰陽性對照不需吸附劑處理。處理后的血清要離心10～15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測。
4. 在載玻片的每孔中加15μl吸附劑處理過的血清。在一個載玻片的每孔中加入15μl不稀釋的陽性對照，在另一個載玻片的每孔中加入15μl不稀釋的陰性對照。
5. 將載玻片放入濕盒中，37℃溫育90分鐘。
6. 用PBS洗液的緩慢水流沖洗載玻片（避免直接沖入孔內）后，浸泡在PBS中并放置在水平搖床上輕輕搖動10分鐘。將載玻片用蒸餾水緩慢水流沖洗（避免直接沖入孔內）。
7. 載玻片自然晾干。
8. 每孔加入15μl FITC結合物溶液（不需稀釋）。
9. 將載玻片放入濕盒，37℃溫育30分鐘。
10. 重復7和8的洗滌步驟。
11. 加幾小滴封閉介質，小心蓋上蓋玻片。
12. 盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察結果。如果不能立即觀察，可將其避光放置于 2℃～8℃，不超過24小時。