免疫熒光技術簡介

免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術，根據抗原抗體反應的原理，將熒光素偶聯到已知的抗原或抗體上制成熒光探針，與血清或體液、細胞、組織中存在的相應抗體（或抗原）結合，從而對這些組織中存在的抗原或抗體進行定性、定量和（或）定位的檢測。

用于熒光標記的抗體，應遵循以下幾個原則：特異性強、高純度、效價滿意（>1:20），最好采用單克隆抗體。

用于抗體標記的熒光素需要具備以下條件：能夠與蛋白質形成穩定的共價鍵；標記后不影響蛋白質和自身的生物學活性；熒光效率高，標記后熒光強度下降不明顯；熒光色澤與背景色澤對比鮮明；標記方法簡單、快速；安全無毒。

熒光抗體的保存原則是：防止抗體失活；保持熒光素不脫落和不淬滅。

免疫熒光技術的染色方法分為直接法和間接法。直接法的原理是將熒光標記的抗原/抗體直接與相應抗體/抗原反應，多用于流式細胞儀分析。直接法的優點是操作簡便、特異性高，非特異性熒光染料少。但直接法的靈敏度偏低，而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體，若檢測多種抗原需制備多種相應的熒光標記抗體。間接法的原理是先用未標記的抗體進行標記，使抗原抗體充分結合，然后洗滌，除去未結合的抗體；然后加上熒光標記的二抗，使之與已經結合在抗原上的一抗結合。