一、微生物學檢查
可采集水皰液、腦脊液、唾液、陰道拭子等標本接種于人胚腎、人羊膜或兔腎等易感細胞，經過2～3天培養后，觀察細胞病變。HSV分離株的鑒定和分型通常采用免疫組化染色法。用原位核酸雜交或PCR法檢測標本中的HSV DNA，敏感性和特異性均高。
二、核酸擴增實驗
單純皰疹病毒的核酸擴增實驗法（NAATs），已成為確認皰疹感染的高靈敏度方法，臨床標本包括生殖器潰瘍、黏膜表皮部位及腦脊髓液等標本。PCR方法對無癥狀HSV病毒播散的檢測特別有用。HSV NAATs擴增檢測最大的限制是檢驗的費用。此類特別的樣本要用滌綸（Dacron）擦拭棒收取并置于病毒傳送培養液中：NAATs標本在4”C時可保存72h，若需長期保存標本應保持在-20”C。此NAATs比病毒培養法檢測單純皰疹病毒的靈敏度高四倍 。
三、血清抗體測定
HSV血清測試在下列情形可能有價值：
①HSV病毒培養陰性而有再發的生殖器官癥狀或非典型的皰疹癥狀；
②臨床診斷生殖器皰疹，而無實驗診斷證據；
③標本采集不足或運送不理想；
④調查無癥狀患者（即生殖器皰疹患者的性伴侶）。