凍融法回收DNA片段可用于:(1)獲取純化的DNA片段;(2)回收PCR產物。
| 實驗方法原理 | 凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。 |
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| 實驗材料 | DNA膠條 |
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| 試劑、試劑盒 | Tris-HCl飽和酚H2O酚 氯仿氯仿無水乙醇NaAcTE |
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| 儀器、耗材 | 離心管離心機 |
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| 實驗步驟 | 1. 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條,將切下的膠條(小于0.6g)搗碎,置于1.5ml離心管中;
2. 加入等體積的Tris-HCl飽和酚(pH 7.6),振蕩混勻;
3. -20℃放置5-10min;
4. 4℃離心10000g×5min,上層液轉移置另一離心管中;
5. 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,振蕩混勻;
6. -20℃,放置5-10min;
7. 4℃離心10000g×5min,合并上清液;
8. 用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次,取上清;
9. 加入1/10體積3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍體積預冷的無水乙醇,混勻;
10. -20℃,靜置30min;
11. 4℃離心13000g×10min,棄上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;
12. 加適量H2O或TE溶解沉淀。 收起 |
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| 注意事項 | DNA的膠條應全部融化再進行提取。 |
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| 其他 | 現在多用試劑盒進行DNA回收。 |
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