分離肝臟質膜的Neville法實驗

切碎的大鼠肝臟

溶液 A 蔗糖 溶液 B

Doimce 氏玻璃勻漿器 離心管 折射儀 SW-28 轉頭及薄壁 polyallomer(同質異晶聚合物） SW-28 離心管

材料與設備

切碎的大鼠肝臟（約 25 g; 冷凍保存至用前）

注：人的胎盤是極好的制取胰島素受體的原料。遺憾的是，非醫學中心附屬機構的研究人員可能很難得到人的胎盤。

Doimce 氏玻璃勻漿器（15-ml), 帶有 A、B 杵

粗布（干酪包布）

離心管（250-ml）

折射儀（No.13_947;Fisher Scientific 公司或其他品牌）

SW-28 轉頭及薄壁 polyallomer(同質異晶聚合物）SW-28 離心管

試劑

溶液 A

蔗糖〔69%(w/w) 和 42.3%(w/w)〕

溶液 B

(配方，見「試劑的配制'PP.234~240)

操作程序

此操作程序據 Neville(1968) 的方法改進而成。全部操作在 4℃下進行。

1) 取約 68 切碎的鼠肝，置中號（15-ml)Dounce 氏玻璃勻漿器內。加 8 ml 冰冷的溶液 A, 置冰浴用松的 B 杵抽研鼠肝 8 次。緩緩操作不要使勻漿濺出。然后將勻漿倒入 500 ml 溶液 A(置冰浴) 中。重復此操作, 分三批處理其余約 18 g 鼠肝，并將勻漿均倒入上述 500 ml 溶液 A 中。最終的混合物攪拌 3 min 后，用雙層粗布過濾，收集于 2000-ml 燒瓶中。
注：制備組織勻漿時，研杵要上下抽研以形成剪切力，旋擰是沒什么用的。如果研杵抽拉太困難，可以慢慢取出，再用紙張擦去附于研杵球部的結締組織纏繞物。不要向下用力沖研沒有支撐好的勻漿器，否則會弄破勻漿器。要用手抓牢勻漿器同時將它支撐于冰筒中。要避免在勻漿中產生氣泡。

2) 將濾過的勻漿分置于 6 個 250-m 的離心管中，4℃ 下 1500 g（JA-14 轉頭,3200r/min) 離心 10 min。用吸管將上清慢慢吸出，但不要攪動松疏的沉淀物。然后把沉淀移至置于冰浴中的 15-ml Doimce 氏勻漿器中。

3) 用松的 B 杵溫和抽研三次，勻漿沉淀物, 測量勻槳體積。

4) 將勻漿倒入燒杯。加等體積 69%(w/w) 的蔗糖溶液，攪拌混合至無可見的絮狀物。用折射儀檢査溶液的蔗糖濃度。加水或 69% 的蔗糖液調節，使蔗糖-勻漿混合液含有 44% 的蔗糖（折射率為 1.4076)。
注：折射儀測量時，每次讀數間隙要充分混勻勻漿。

5) 將勻漿倒人若干 SW-28 離心管，毎管 20 ml。

6) 小心地在每份勻漿頂層加 10 ml 42,3%(w/w) 冰冷的蔗糖液 (折射率為 1.4042)。

7) 用 42.3% 冰冷的蔗糖液平衡離心管。

8) 將離心管放入冷的 SW-28 轉頭，25000r/min(90000 g) 離心 2 h，檢查 0 型圈上的真空脂，確保轉頭無泄漏。

9) 用刮勺移出浮在離心管頂層上 2-4mm 厚的膜層，轉移至同一個 SW-28 管。加人溶液 B，溫和混勻。4℃ 下 25000r/min 離心 30 min 收集膜部分，此步可去除蔗糖。棄去上清后，再加 3 ml 溶液 B 于沉淀物。于 Dourtce 氏勻漿器（15-ml) 中用 A 杵溫和勻漿沉淀物，懸液等分分裝于微型離心管，每份 0.25ml。-20℃ 凍存。