1. 加入約0.5 pmol 重組質粒DNA于0.5 ml 微量離心管中，如果體積大于20 μl 應以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。
2. 如果體積小于20 μl，用水補足20 μl。
3. 加入2 μl 2 mol/l NaOH / 2 mmol/l EDTA，用微量移液器上下抽吸輕輕混勻，于25~37℃溫育5 min 后，樣品置于冰浴，加入水，用微量移液器徹底混勻。
4. 加入75 μl 3 mol/l pH6.0的乙酸鈉緩沖液，以中和DNA溶液。
5. 用微量移液器上下抽吸溶液以徹底混勻，滴1 μl 于pH試紙測pH。
6. 然后每1 μl 地逐次加入3 mol/pH6.0緩沖液直至pH≤7.0。
7. 加入75 μl 95%乙醇，干冰放置10 min。
8. 于4 ℃微量離心10 min，小心移去并棄上清。
9. 加入400 μl 70%乙醇，于4℃微量離心10 min，然后小心棄去乙醇。
10. 在Speedvac真空旋轉蒸發器中干燥10 min，貯存于20℃（可長達幾周）直至作為模板用于雙脫氧反應。 | 