總單位時間內底物減少或產物增加的量。
根據米氏方程和Lambert-Beer定律可推得：
△A為t2-t1期間反應體系吸光度的變化。
ε為消光系數，L為光徑。
從此式可以看出，在t2-t1時間內吸光度的變化與所測物質濃度成正比。
實際操作中，測定兩個固定時間的吸光度差值，只要此期間待測物消耗＜5%，就可以采用標準濃度對照法計算樣本濃度，所以動力學法有時又稱為固定時間法。
與終點法相比，動態法測定中待測物無須完全轉化，故工具酶的用量較少，為了保證有足夠的測定線性，所用酶的Km應足夠大。如所用工具酶Km太小，可在反應體系中加入競爭性抑制劑，以加大Km。
動力學法對于測定儀器的要求更嚴格，動態法由于測定反應動態過程中的吸光度，檢測的信號小，溫度對測定的影響很大，這要求儀器的電噪聲小，吸光度應讀準到0.0001，溫度變化＜0.1%。