單克隆抗體的制備步驟

1、免疫動物的選擇：

免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。

2、細胞融合：

采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3、選擇性培養：

選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。

4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化：

在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。

5、單克隆抗體的大量制備：

單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內誘生法和體外培養法。