單克隆抗體的制備（三）

3.2 免 疫 B 細胞的制備

血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得單細胞懸液，不能用毛玻璃磨碎組織取細胞，因為那樣可損害細胞膜的完整性。在準備骨髓瘤細胞的同時，脾細胞或淋巴結細胞用無血清培養基洗3 次（4°C ，1000r/m in離 心 lOmin) ，計數并用 20m l 無血清培養基重懸，放 入 50m l 聚丙烯離心管，置于冰上。通 常 ，1 只免疫后小鼠可收獲得IXlO8 個脾細胞，免疫后亞美尼亞倉鼠可收獲得0.6X 108 個脾細胞。

3.3 融合和鋪板

細胞融合前, 所有材料和設備都應準備好，培養基組分要預熱到合適的溫度（圖 5. 3)。

B 細胞的融合程序

生物安全柜要徹底清潔，并 用 7 0 % 乙醇擦拭。所有培養基組分要濾過除菌。電子移液器應該安裝有新的濾膜，多道移液器應該擦拭以減少任何污染機會。如果使用滋養細胞，含滋養細胞層的細胞培養板應該放在顯微鏡下檢查細胞有沒有污染。其他需要用到的物品包括計時器和2m l 、10m l 和 25m l 的移液管。免疫反應性B 細胞和骨髓瘤細胞重懸于無血清培養基中，并保存在4°C 條件下。下列組分要預熱至37°C : 隔熱的燒杯（充當水浴），5 0 % 聚乙二醇溶液（每個脾用lm l) ,IOml含 1 0 % F B S 的 DM EM 完全培養基，最后鋪板用 的 含 2 0 % F B S 的 DMEM完全培養基。細胞計數，并計算活細胞比例，做記錄。根據計數結果確疋骨髓瘤細胞的用重（見下述）和最后鋪板所需的培養基用量（I X IO5 個細胞/孔）。

在細胞融合前將免疫淋巴細胞與骨髓瘤細胞按一定的比例混合。兩 者 的比例由于使用動物的不同、骨髓瘤細胞系的不同，以及不同的實驗室之間都會有少許的差異。在我們實驗室，小鼠或大鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3X63Ag8. 653)混 合 的 比 例 是 5: 1。亞美尼亞倉鼠脾細胞與骨髓瘤細胞混合的比例是4 : 1。為了更好地產生B 細胞雜交瘤，骨髓瘤細胞是按照適當的比例加人到免疫脾細胞或淋巴結細胞中的。例 如 ，2 X 107 個骨髓瘤細胞應該和I X l O 8 個小鼠脾細胞混合。混合細胞在50m l尖底離心管中混合后，在 4°C ,1000 r/min，離 心 lOmin。離心后，將上清液完全倒干凈，將管底的細胞沉淀震動打散，使細胞均勻地鋪在管底。將含有骨髓瘤細胞和B 細胞混合物的試管放在含有37°C 熱水的隔熱燒杯中。

以下的操作都在37°C 進行。在 37°C 的時候，細胞膜的流動性更大，這 對 由 p e g 1500介導的細胞融合過程是有利的。保溫的細胞混合物、37°C 預 熱 的 5 0 % PEG 、預熱的含1 0 % F B S 的 D M EM 都放在超凈臺中。為了使免疫反應性B 細胞與骨髓瘤細胞融合，在37°C 水浴中，一邊旋轉輕輕搖動細胞管 ，一 邊將混合細胞中逐滴加人lm l的 50% 的 PEG

溶液（lm in 內加完）。盛有混合細胞的錐形離心管與水平面應成一個角度，以便使每一滴P E G 都能輕輕地沿著細胞懸液的上緣與鋪在管底的單個細胞均勻地混合。將融合細胞在 37°C 再 輕 輕 旋 轉 30s 。隨后，P E G 下 面 在 一 系 列 定 時 加 人 的 預 熱 的 含 i 〇 %F B S 的

D M EM 中慢慢稀釋。首先, 在37°C 的水浴中于2m in內邊旋轉邊加入2m l預熱的含10%F B S 的 DMEM，然后，同樣在2m in內邊混合邊加人8m l的上述培養基。這種稀釋的包含脾細胞、骨髓瘤細胞及新形成的雜交瘤的混合物在4°C 1000r/min離 心 lOmin。然后棄上清，細胞沉淀用含2 0 % F B S 的 D M EM 完全培養基輕輕重懸，使用大口徑的移液管(25 ml)重懸。新形成的雜交瘤細胞很脆弱，不要用力振蕩或渦旋。

將新生成的雜交瘤細胞重懸在適當體積的培養基中，使每孔約含細胞I X l O 5 個 ，接種在帶低蒸發蓋的9 6 孔板中。如果雜交瘤細胞要接種在已含有滋養細胞層（每 孔 75ul的腹腔灌洗細胞或脾細胞）的板中，那么新的融合細胞重懸后的濃度應為L 3 X 106 個細胞/ml , 每 孔 加 75^1， 這樣鋪板后的融合細胞密度為I X l O 5 個細胞/孔 。每孔細胞總體積

為 150/^1。 如果不使用滋養細胞，那 么 要 在 含 2 0 % FBS的 DMEM完全培養基中添加生長因子，如 添 加 1 % ?5 % 的雜交瘤細胞克隆因子（Origen HCF, IGEN Inc.)。在這種情況 下 ，新生成的雜交瘤細胞重懸后的濃度應為6. 7 X IO5 個細胞/ml, 以 便 使鋪板后每孔150/^1中含有I X l O 5 個細胞，跟前面描述的一樣。每 孔 15〇沁含 I X l O 5 個融合細胞的細胞培養板在 37°C ，5 % CO2 和 9 5 % 濕度的條件下培養過夜。融合后第一天，細胞要在含H A T 的培養基里選擇培養（每 孔 加 50jul的 含 2 0 % F B S 的 D M EM 完全培養基十4 倍濃度 的 HAT)。此時，每個孔里都有很多活細胞，沒有或很少有細胞碎片。在融 合 后 的 24 h而不是融合的同時加入11八丁(50； /1，4 \ ^ ：八丁濃縮液），目的是使細胞從融合過程的最初壓力中恢復過來，從而提高陽性克隆的產量。

細胞在選擇培養基中培養（嘌呤和嘧啶生物合成的主要途徑被氨基蝶呤阻斷），骨髓瘤細胞（缺 乏 HGPRT)如果沒有或沒有有效地與脾細胞融合，將由于缺乏核酸補救合成途徑所需的酶而開始死亡。同樣，沒有與骨髓瘤細胞融合的脾細胞在培養基中也只能活幾天。培 養 3?5d 后 ，能明顯地觀察到活細胞數量的減少和細胞碎片的增強。融合后第5 天開始，細胞培養板一周要換液三次。用吸管或多道移液器吸去一半的細胞培養上清(約lOOul)。無菌的移液器吸頭插人培養孔的一半，將上清輕輕吸出，不要攪動底部的細胞 。然后補人1〇〇 ?125JU 丨含I X H A T 的新鮮DM EM 完全培養液（含 2 0 % FBS) ，如果最初沒有使用滋養細胞的話，培養基中還應添加生長因子。常規地換液是給生長中的雜交瘤細胞補充營養物質，維持細胞健康、旺盛生長，去除細胞代謝產生的廢物和死亡細胞碎片 ，減少培養孔中由未融合的B 細胞或不能増殖的不穩定雜交瘤細胞分泌的免疫球蛋白。通過給細胞頻繁更換培養液，可以去除暫時表達的抗體，以減少篩選過程中假陽性孔出現的可能性。這在免疫后動物血清效價高（> 1 : 50 000)的融合中是很明顯的。融合細胞要在含H A T 的選擇培養基中培養大約2 周 。以后的培養可由H T 替 代 H A T ，因為未融合的骨髓瘤細胞已不復存在了，不再需要氨基蝶呤的選擇作用了。

融合 后 約 14d，大多數細胞培養孔都顯示細胞生長旺盛。檢查細胞培養孔，可見葡萄串樣的雜交瘤細胞團變得更加明顯，并不斷增大。根據接種時描述的條件（I X l O 5 個細胞/孔），每個細胞培養孔中都有可能長出多集落的雜交瘤細胞。每孔不一定是單克隆。一般來說，按照上面建議的細胞接種密度，8 0 % 以上的細胞培養孔中都應有活性分裂細胞 。如果含有活性分裂細胞的孔比例低，原因可能是融合時骨髓瘤細胞健康狀態不好（如

細胞不處于對數生長期）、經靜脈沖擊免疫后B 細胞沒有被有效地激活、細胞沒有被有效融合、細胞培養條件不適當或支原體污染等。在大多數有雜交瘤細胞生長的培養孔中，當細胞生長達到鋪滿5 0 % 孔底時，此時細胞培養上清中的抗體（可 達 到 l ^g/ml)足以用來鑒定抗原。取一半的細胞培養上清用于抗體篩選試驗。用于篩選試驗的細胞培養上清應該是培養了 2d 的細胞培養上清，以使培養液中的抗體達到最高水平。每個細胞培養孔都必須使用一個單獨的移液器吸頭，以防止交叉污染。當細胞培養上清被轉移到復制板中后 ，要給雜交瘤細胞補充新鮮的培養液（如上所述）。由于這些雜交瘤細胞是處于對數生長期，所 以在48 h 內確定篩選結果是必要的，以便對陽性克隆進行擴增或其他處理。雜交瘤細胞仍然用含H T 和 2 0 % F B S 的 DM EM 完全培養基培養。

3.4 篩選

有很多篩選策略可用于雜交瘤細胞的篩選。常見的方法包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、免疫沉淀、結合抑制試驗、流式細胞術、免疫印跡分析、免疫組化和功能中和試驗等。在選擇篩選方法時的一個重要思考是「你的抗體用于什么就用什么去篩」。篩選策略必須能夠反映所需抗體隨后的用途。例如，ELISA作為篩選手段篩出的抗體可能不能結合表達在細胞表面上的天然分子，這些分子要用流式細胞術檢測。同樣, 用功能中和試驗篩選出的雜交瘤細胞分泌的抗體可能不能用于免疫印跡分析或免疫組化。

在選擇篩選策略時，必須要考慮下面的因素：能夠處理多達1000個樣品（約 12 0 ul/樣品）的能力、48 h 內完成鑒定的能力、是否具備必要的試劑/設 備 、反應的特異性、實驗體系的靈敏性，以及最重要的是否能得到結果。篩選時要用融合前的免疫血清作為陽性對照。這將確保所有的技術、試劑、設備是最合適的。同樣，用培養雜交瘤細胞的培養基(作為陰性對照）評估篩選結果也是很重要的。這種 含20%FBS及生長因子的培養基可能會干擾一些實驗檢測。例如，HAT/HT選擇培養基中含有高濃度的胸腺嘧啶，在增殖實驗中可

以阻止3 H-胸腺嘧啶的有效結合。為了鑒定出分泌所需單抗的雜交瘤克隆，通常需要用多個、多層次的篩選手段。用培養了 48 h 的雜交瘤細胞培養上清可用于多個篩選實驗，多種篩選實驗數據的匯總用來確定產生抗體的雜交瘤細胞。

免疫原的性質對篩選方法的選擇也是有幫助的。用肽抗原制備的抗體篩查可將肽抗原結合在酶標板上，很容易地用ELISA進行篩選，然后進一步用其他的篩選方法以鑒定抗體的其他功能。流式細胞術可用來檢測和表面球蛋白反應的抗體，然后再進一步用功能中和實驗或配體結合抑制實驗來篩選。另一個要考慮的事項是抗體的同種型。能特異性識別免疫球蛋白同種型的二抗可用來檢測抗原反應性抗體是IgG 重 鏈 而 不 是 Ig M 重鏈 。重要的是，確定陽性克隆（和丟棄陰性克隆)必須依據兩個獨立的篩選試驗的結果，即

使是完全相同的實驗操作重復一次也是需要的。因為在篩選融合細胞時，重復試驗有助于評估實驗體系的重復性，減少出現假陽性或假陰性的風險，有助于鑒定出反應最強的細胞 系 ，并為選擇雜交瘤細胞系提供多種參數。陽性克隆擴增后供進一步分析，而陰性克隆就舍棄了。重要的是要記住，最初篩選得到的陽性孔細胞并不是單克隆，可能呈現出多種結合特性。

3.5 亞 克 隆 和 低溫 凍存

平均來說，用典型的融合方法制備的雜交瘤，1 % ?3 % 的孔會分泌能夠與抗原反應的抗體。一旦使用兩個獨立的篩選試驗確定了陽性克隆，這些細胞應該立即進行亞克隆, 分離出能夠分泌抗體的單克隆雜交瘤細胞，同時擴增并凍存該原始陽性克隆。陽性克隆中通常含有不止一種穩定的雜交瘤細胞，因此，必須再進行克隆，以便得到只分泌一種抗體的單個克隆的雜交瘤細胞。在原始孔中可能存在著不分泌抗體的雜交瘤細胞和含不穩定染色體的雜交瘤細胞，這些細胞的生長能力可能比分泌抗體的雜交瘤細胞更強。單細胞克隆化是一個漫長(數星期到數月）而辛苦的過程，但是對分離能夠產生高水平預期抗體的穩定雜交瘤細胞是必需的。有幾種同等價值的亞克隆方法可供使用，包括有限稀釋法和軟瓊脂克隆法。

在這里，我們介紹有限稀釋法，是一種簡單、易操作的技術。無論選擇哪種方法，雜交瘤細胞都要經歷至少兩輪亞克隆，以減少兩個細胞正好黏在一起形成克隆的可能性。這不僅為分離單克隆雜交瘤細胞提供了機會，也為選擇具備最佳生長特性和分泌高水平抗體的雜交瘤細胞提供了機會。培養低密度的雜交瘤細胞需要滋養細胞或條件培養基以提供生長所需的生因子。如上所述，滋養細胞可用同系動物的脾細胞、胸腺細胞或巨噬細胞。原代培養的細胞是生長因子的極好來源，由于其在體外生存能力有限，不會污染長期培養的雜交瘤細胞。從未接觸過目的抗原的動物組織中制備單細胞懸液。這些細胞的鋪板密度為2 X 104 個細胞/孔（與 細 胞 融 合 時 鋪 板 的 滋 養 層 細 胞 密 度 相 比 ，亞 克 隆 過 程 要 用 更 高 的 細 胞 密度），0. Iml/孔（9 6 孔細胞培養板）。同樣，滋養細胞層至少應該在使用前1 天 鋪 板 ，使產生的生長因子積累在培養上清中，同時也可用來驗證原代培養的細胞沒有污染。另外 ，許 多商品化的生長因子補充劑（很多都含IL-6)可以取代飼養細胞的使用。克 隆 時 ，按照制造商的產品說明書將這些產品簡單地加到培養基中就行了。

按照下面的操作程序可以獲得單個克隆的細胞。對雜交瘤細胞進行適當的稀釋以使細胞能以三種濃度鋪板：100個細胞/孔 、1 0 個細胞/孔 和 1 個細胞/孔 。初始克隆鑒定出的抗體分泌陽性孔，讓細胞生長到近8 0 % 的匯合，然后輕輕地重懸，并進行活細胞計數(不能被臺酚藍染色的確定為活細胞）。取 5000個活細胞轉入裝有5m l含 H T 的 DMEM完全培養基(亞克隆過程中最好不要改變培養基成分）的聚丙烯錐形管中，這樣形成的細胞懸液濃度為1000個細胞/ml。利用這種細胞懸液，依次進行1〇倍稀釋，便可分別得到濃 度 為 100個細胞/ m l和 1 0 個細胞/m l的細胞懸液。在兩塊已添加滋養細胞或補充成分 （100^1/孔）的 9 6 孔細胞培養板的最上面一行（A 行 )加 入 100^1濃 度 為 1000個細胞/ml的細胞懸液，使每孔含有100個有活力的雜交瘤細胞。這種密度的細胞，大 約 在 1〇 d 內能

生長到匯合。在每塊細胞培養板的B 行 ，加 入 100^1濃 度 為 100個細胞/ml 的細胞懸液，使每孔中含有1 0 個有活力的雜交瘤細胞。在細胞培養板的其他幾行（C ? H 行）加入100ul 濃 度 為 1 0 個 細 胞 /m l的 細 胞 懸 液 ，使 每 孔 中 含 有 i 個 有 活 力 的 雜 交 瘤 細 胞

(圖 5.4 )。雜交瘤細胞的擴增和有限稀釋法亞克隆程序

克隆很少或生長很慢，只能從接種較高密度接種的細胞孔中分離陽性克隆，因此，在一些孔中每孔接種1 0 個細胞或100個細胞，當不能從接種單個細胞的孔中得到克隆時，可以從這些孔中得到。這種分離得到的不一定是單克隆，應該進行多輪亞克隆篩選。最好是從 接 種 1 個細胞的培養孔中選擇克隆。應該從視覺上檢查每個培養孔中單獨克隆的形成 。此外統計分析表明，在接 種 1 個 細 胞 的 培 養 孔 中 ，得 到 的 陽 性 孔 里 6 3 % 是單克隆[24]。每個原始陽性克隆都應該用有限稀釋法進行至少兩輪亞克隆。對每個原始克隆進 行 的 3 次亞克隆都鑒定是審慎的，擴增并凍存這些克隆以進行進一步亞克隆或分析。如果很難獲得單克隆的雜交瘤細胞，可以在亞克隆前用流式細胞術對雜交瘤細胞進行分選 。雜交瘤細胞由于表達膜表面免疫球蛋白可以被染色，分 離 1 % 的陽性細胞，然后用有限稀釋法鋪板。這種方法可能有助于更迅速地分離和鑒定產生最高水平抗體的雜交瘤克

隆 。不能鑒定出任何陽性克隆可能是由于技術上的困難、鋪板密度計算錯誤或者可能反映最初鑒定培養條件的嚴重不穩定性。在亞克隆的整個過程中都應該進行原始陽性克隆的培養，并監測抗體產生的穩定性。如果這一段時間細胞培養抗體檢測始終是陽性的，那么它們可作為再次用有限稀釋法進行亞克隆的細胞來源。如果在持續培養的過程中抗體產生變為陰性的話，說明這些細胞系可能是不穩定的。這時需要解凍凍存的原始克隆, 在體外擴增2?3d，然 后 在 6 塊或更多的9 6 孔板中進行亞克隆（如上所述）。這將是重新獲得分泌特異性抗體雜交瘤細胞的最好機會。在亞克隆的過程中，通 常 有 高 達 2 0 % 的初始鑒定為陽性的克隆變為陰性，不再分泌抗體；因此，如果可能的話，應該鑒定多個分泌抗體的細胞系并建庫凍存。

一旦單克隆的雜交瘤細胞系已確立并建庫凍存，就應該換成不含H T 的培養基培養細胞，并逐漸減少任何生長因子的添加。這可能需要多次傳代的適應過程，每代減少一半的生長因子。這期間，細胞的增長率可能會降低；然 而 ，這往往伴隨著抗體產生的增加。在所有的添加物都已去除后，FBS的使用濃度也可減少。通常情況下，培養雜交瘤細胞的 FBS濃 度 可 以 從 20%、1 5 % 、1 2 % ，并 最 終 過 渡 到 10%。一 些 細 胞 系 ，甚 至 可 用 5%FBS培養，并最終用無血清培養基培養。每一步都應該對雜交瘤細胞的生長特性和抗體產生能力進行監測。單克隆的雜交瘤細胞確立后，其分泌的免疫球蛋白的同種型也能夠被確定。有多種商用的試劑盒及試劑可供使用。同種型的鑒定對于選擇抗體的純化方法是至關重要的，也會影響特定抗體的功能。

原始的陽性克隆及頭三次亞克隆的細胞株擴增后都應該凍存。單個孔的細胞擴增

慢 ，細胞密度維持在I Xl O5?I X l O 6 個細胞/ml。凍存前，細胞應處于對數生長期。 4℃離心收集細胞，用已濾過除菌并預冷到4°C 的 含 1 0 % DM SO的培養基重懸細胞沉淀，并調整濃度為5 X 106 個細胞/ml。多管 裝 有 I m l細胞懸液（5 X 106 個細胞）的凍存管先在一70°C 凍存數天，然后轉移到液氮中長期儲存。細胞系在鑒定和分離的每一階段都應凍

存??包括初始融合時鑒定的陽性克隆，第一輪和第二輪亞克隆的陽性克隆。此 外 ，每一步應該凍存多個克隆，在關鍵的細胞系丟失后能從前面的凍存克隆中找回 。 一 般來說，每次克 隆 凍 存 1 0 管是合適的。液氮中的細胞可保持數十年，雖然隔幾年將這些細胞復蘇并重新凍存是明智的。

3.6 雜 交瘤 細 胞 的 擴 增

在產生特異性抗體的雜交瘤細胞分離、克隆并凍存建庫后，擴增雜交瘤細胞可生產抗體 。處于對數生長期的雜交瘤細胞培養上清可產生3?20p g /m l的抗體。根據實際所需單克隆抗體量，可選用不同雜交瘤擴增方法(第6 章）。擴增前，雜交瘤細胞必須是單克隆的 ，以防止不分泌抗體的細胞過度生長，降低抗體的產生。在很多情況下，需要的抗體量不 足 20 mg，那么使用細頸瓶或滾瓶簡單的擴增細胞就可產生足夠數量的抗體供使用。如果需要生產20?200m g的抗體，可以使用滾瓶培養，或者使用經專門設計的能供細胞局密度生長的細頸瓶培養（CeLLine flask, Integra), 或者小型生物反應器擴增細胞。大規模的抗體生產需要專門設備和專門技術，或者從多輪小規模的抗體生產中累積得到。

雜交瘤細胞可以在多種不同類型的培養基中培養以進行擴增和抗體生產。許多雜交瘤細胞可在低濃度的血清（2 % ?5 % ) 或專門的無血清培養基中生長。應該盡量使用牛免疫球蛋白含量低的血清培養雜交瘤細胞，以免在最后抗體制備中有其他的污染抗體。有專為雜交瘤細胞準備的無血清或不含任何動物蛋白的培養基可供購買，以利于抗體的生產和純化。不同的雜交瘤細胞對不同類型的培養基的反應可能不同，因此在進行大規模擴增前，應該對其在不同類型培養基中的生長情況和抗體產生水平進行評估。在大規模擴增時還要考慮的一個因素是所用培養基的質量。所有試劑都應檢測內毒素的污染情況 ；最好使用內毒素含量低于0. 2 EU/m l的試劑。內毒素污染可以改變體外培養細胞的反應，也可導致供體內使用的抗體無用。有多種產品可用于去除抗體中的內毒素，然 而 ，它們也常常導致大量蛋白質的丟失。細胞培養上清中的抗體，可直接用于多種實驗體系(免疫沉淀、免疫印跡分析），但在許多應用中需要使用純化的單克隆抗體。抗體純化的方法 在 第 7 章講述。抗體的純化程序依賴于特異性抗體的種屬來源和同種型。單克隆抗體化后，最后應該對抗體的特異性和質量進行監測。有一些參數可用于對抗體的評估，包括無菌、濃度（> 0. lmg/ml)、純度（ 用 SDS-PAGE 檢測）、相互凝集的情況、內毒素污染(在體內使用時< 〇.2EU/mg)和蛋白質 A 的污染（< 5 0 ng/ml)

4 結論

單克隆抗體是重要的研究工具、診斷試劑和臨床治療手段。方法學在抗原制備、免疫策略、高通量篩選和抗體生產等方面的不斷發展加速了新型抗體試劑的產生、鑒定和生產 。如今，單克隆抗體不僅被用于研究和實驗室診斷，并且已經被作為治療試劑在多個領域都有廣泛的用途，如移植、腫瘤學、感染性疾病和很多其他學科領域。此 外 ，抗體的修飾 ，包括添加標簽、嵌合抗體、人源化抗體和基因工程抗體，都在擴大其在很多領域的用途 。表 5. 4 提供了一個網站列表，提供了一些關于已制備出的抗體和雜交瘤細胞的來源、操作手冊、問題的診斷和解決方法指南、供應商和各種抗體相關鏈接的信息。許多商業機構可以為客戶提供雜交瘤制備技術; 然而，對那些基本的組織培養技能的研究者，這里描述的方法為自己成功制備雜交瘤打下了基礎。精心設計的免疫方案和篩選策略將會使你分離和鑒定出能分泌所需特異性抗體的獨特的雜交瘤細胞。因此，雜交瘤技術的發展和抗體生產將繼續履行他們的承諾：單克隆抗體在醫學領域及工業上都是有應用價值的工具 [1]。