1. 前言
單抗藥物主要是由兩條重鏈和兩條輕鏈通過鏈內和鏈間二硫鍵以及非共價鍵組成，分子質量大約在 150 kD 左右，每條重鏈和輕鏈在 N 端都包含一個可變區域，在 C 端都包含一個恒定區域，并且在每條重鏈上還存在一個 N 糖基化位點，該位點含有不同的糖鏈結構，如圖 1 所示。目前，在生物制藥領域中，單抗藥物以其高效的治療靶向性和特異性，越來越受到制藥公司和醫療單位的青睞。為了保證單抗藥物的有效性，以及單抗藥物生產過程的實時監控，對于單抗藥物的整體分子質量的測定、氨基酸序列的鑒定，糖基化位點的確認，二硫鍵的定位，糖鏈結構的解析等重要的分析技術，越來越受到制藥公司的關注。隨著生物質譜技術的不斷發展和推廣，基于生物質譜的單抗分析技術也開始全面、快速的開展起來。
目前，LTQ-Orbitrap Elite 組合式質譜儀結合了以前的雙壓線性離子阱質譜儀和新型高場 OrbitrapTM 質量分析器，提高了 MS和 MSn 的性能和多功能性。該系統具有高于 240,000 的分辨率（FWHM）、更高的靈敏度、高掃描速度和更大的動態范圍，同時結合了多種碎裂技術，為深度復雜樣品分析，包括蛋白質組學、代謝組學、脂類組學等樣品的鑒定，翻譯后修飾和定量分析，提供了全面、高效和快速的質譜分析平臺。
圖 1. 單抗藥物的簡單結構示意圖（V 表示可變區域，C 表示恒定區域，L 表示輕鏈，H 表示重鏈。）
2. 實驗部分
2.1 分子質量測定
2.1.1 儀器和試劑
質譜儀器：LTQ-Orbitrap Elite（賽默飛世爾科技，美國）；
色譜儀器：Accela 液相色譜系統（賽默飛世爾科技，美國）；
色譜柱：BioBasic 色譜柱（C8, 1×100 mm，5μm，300 ?）
（賽默飛世爾科技，美國）；
試劑：二次去離子水，色譜級乙腈，色譜級甲酸。
2.1.2 儀器方法
色譜分析條件：具體見表 1；
質譜分析條件：具體見表 2；
2.1.3 數據分析方法
采用 Protein Deconvolution 2.0 軟件對原始質譜圖進行去卷積處理，得到完整的蛋白質分子質量信息。
表 1. 單抗分子質量測定的色譜分析條件
表 2. 單抗分子質量測定的質譜分析條件
2.2 氨基酸序列測定
2.2.1 儀器和試劑
質譜儀器：LTQ-Orbitrap Elite（賽默飛世爾科技，美國）；
色譜儀器：Easy-nLC 1000液相色譜系統（賽默飛世爾科技，美國）；
色譜柱：Nano 色譜柱（C18，75μm × 150 mm，2 μm,100?）（賽默飛世爾科技，美國）；
試劑：二次去離子水，色譜級乙腈，色譜級甲酸，PNGaseF 內切糖苷酶，二硫蘇糖醇（DTT），碘乙酰胺（IAA），trypsin 內切蛋白酶。
2.2.2 儀器方法
色譜分析條件：具體見表 3；