3、神經元細胞原代培養
步驟：
1）出生 2 d SD大鼠經戊巴比妥鈉麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預冷的D-Hanks平衡鹽液中。
2）在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內消化20min，中間搖晃一次。
3）用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的培養液（DMEM＋10％FBS）的離心管內終止消化液作用5min。
4）用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的DMEM＋10％FBS的離心管內，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數次，靜置后取上清吸到另一支離心管內。重復上述步驟2～3次。
5）將所收集的上清經200目篩網過濾。
6）過濾后的細胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內加入新鮮培養液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細胞懸液。
7）細胞計數，調整細胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內，放入CO2孵箱中培養。培養48h后換液并加入Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。
皮層神經元
4、小鼠血管平滑肌細胞（組織貼塊法）
試驗方法：組織貼塊法
步驟：
1)頸椎脫臼處死小鼠，開胸、腹腔，暴露心臟剪取胸主動脈
2)用鑷子輕輕剝離血管外結締組織
3)用眼科剪沿縱軸剪開血管條，無菌鑷輕輕刮除內膜
4)用鑷子鈍性加壓刮中膜,待出現裂口后夾住中膜將其取出
5)將取下的中膜加入含 20%FBS 的 DMEM 培養液，用眼科剪剪碎成血管條；
6)用無菌滴管將組織塊吸入細胞培養瓶，均勻鋪于瓶壁，間距約 0.2～0.5cm；
7)將培養瓶直立放置于培養箱；1h 后輕輕放平
8) 每 3d 換液 1 次； 3～8代用于后續實驗
血管平滑肌細胞
5、中心可提供的原代培養種類
中心可提供原代培養種類（部分） | |
呼吸系統 | 肺微血管上皮細胞 肺成纖維細胞 氣管上皮細胞 |
循環系統 | 心肌細胞 心肌成纖維細胞 主動脈平滑肌細胞 主動脈內皮細胞 |
消化系統 | 腸平滑肌細胞 食管上皮細胞 胃上皮細胞 |
泌尿系統 | 腎系膜細胞 腎小管上皮細胞 膀胱逼尿肌細胞 |
腦、神經系統 | 大腦皮質神經元 大腦海馬神經元 膠質細胞 微血管內皮細胞 |
骨、關節、肌肉系統 | 骨髓間充質干細胞 成骨細胞 破骨細胞 軟骨細胞 |
生殖系統 | 子宮內膜上皮細胞
|
眼耳鼻喉口腔系統 | 牙源性間充質細胞 視網膜微血管內皮細胞 |
血液、淋巴系統 | 外周血淋巴細胞 DC細胞 NK細胞等 |