①將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌一次；
②加待測抗原，如兩者是特異的，則發生結合，然后把多余抗原洗除；
③加入與待測抗原呈特異反應的酶聯抗體，使形成“夾心”；
④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產物產生，說明在孔壁上存在相應的抗原。
