填補Qiagen空白、不用DNA酶消化的植物RNA提取試劑盒
一般公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案
很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產物、色素等成分，造成RNA提取過程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復雜。手工的CTAB類的方法提取因為時間太長，太繁瑣，手工方法不在討論之列。一直以來沒有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進口試劑盒也無法滿足科研工作者對植物RNA提取的要求。
下面我們來分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因：
市面上最常見的RNA提取試劑盒無非是兩種：第一種：TRIzol改良類方法（包括溶液型的和離心柱型的）、第二種：直接裂解過柱子的方法（離心柱）
第一種試劑盒失敗的原因1：RNA市面上面最流行的方法就是TRIzol，或者TRIzol改良，或者TRIzol加離心柱一類的改良方法。TRIzol也就是異硫*酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對象是動物源性的組織細胞，針對普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol類原理產品也可以提取。但是多糖、多酚、次級代謝產物豐富的情況下，TRIzol類方法無法防止多糖多酚對于RNA/DNA分相的干擾，要么殘留大量DNA，要么殘留大量多糖、多酚或者次級代謝產物，氧化破壞RNA，或者殘留這些多糖多酚，色素代謝產物等抑制下游的反轉錄等反應。限于技術水平的限制，市面上絕大多數的國產廠家是使用TRIzol的方法進行改良，無論是不是加了離心柱。但是實踐證明，改良不能從根本上解決問題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡單：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二種試劑盒失敗的原因：直接裂解過柱子的方法是目前最先進的方法，但是也是技術含量最高的方法。這個方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂解，RNA/DNA同時過柱子，然后在柱子上面直接分離RNA/DNA，所以，這種方法的優點第一在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因為其技術先進，所以難度很高，國內廠家包括進口公司有兩個技術難點一直沒有突破。第一，裂解液的成分必須針對去除多糖多酚進行研發添加去多糖多酚，代謝產物成分。否則會同樣碰到多糖多酚干擾提取的問題。第二、和TRIzol原理不同，直接過柱法DNA/RNA同時加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個難點。否則會殘留大量DNA。兩個技術難點的沒有掌握導致了國內公司包括的第二種試劑盒失敗。國外公司因為沒有掌握第一難點，裂解液里面沒有去除多糖多酚成分，所以包括Qiagen的RNeasy plant mini kit盒子也常常不能成功提取較復雜植物RNA樣品如黑加侖、冬青等植物樣品。
北京艾德萊生物的研發人員經過3年的不斷研發改良，針對多糖多酚植物的特點，和這兩種試劑盒失敗的原因，開發出了世界領先水平的RN09 EASYspin植物RNA快速提取試劑盒，第一：采用直接過柱子方法，徹底拋棄了TRIzol苯酚，氯仿原理方法，使用無毒原料，并且添加了有自主知識產權的去除多糖多酚成分解決了多糖多酚和代謝產物對于RNA的破壞和干擾分離。第二：突破了直接過柱子的方法DNA去除的技術難點，解決了DNA殘留過多問題。經過實踐過程中，幾十種國內外試劑盒包括Qiagen的RNeasy mini kit 提取失敗的例子，包括棉花蘋果等試劑盒不易提取的樣品，使用北京艾德萊生物的EASYspin植物RNA提取試劑盒，20分鐘可以輕松提取，不需要液氮，無苯酚氯仿。高質量的RNA可以成功完成下游反應試驗。第三：實踐過程中我們發現，部分復雜植物或者DNA含量特別豐富的植物樣品使用Qiagen的RNeasy plant mini kit 會有明顯殘留。嘗試北京艾德萊的RN09 EASYspin植物RNA快速提取試劑盒也一樣有明顯殘留。對此問題Qiagen并沒有提供優秀的解決方案。Qiagen只是建議使用傳統的DNA酶消化的方法來解決，但是眾所周知DNA酶消化的方法非常繁瑣，費時間，消化后要回收，效果不好，還常常降解RNA，讓人望而生畏，而且成本高昂，單單Qiagen的配套DNA酶柱上消化試劑盒就要1100元/50次，如果還要使用RNA清潔純化回收DNA酶消化后的盒子就更昂貴了。近年來北京艾德萊又投入大量研發人力物力，終于獨家并且首家推出RN38 EASYspin plus 植物RNA提取試劑盒解決了DNA殘留問題，該試劑盒使用基因組DNA清除柱子，配合獨家研發的溶液，不需要DNA酶消化，操作簡單僅需增加10秒鐘清除基因組DNA殘留的步驟，不用苯酚，氯仿，30分鐘完成全部試驗過程。我們測試的幾種植物樣品中均已經獲得成功，使用Qiagen的RNeasy plant mini kit 和我們RN09 EASYspin 植物RNA提取試劑盒有殘留DNA的樣品種類使用這款RN38 EASYspin plus 植物RNA提取試劑盒后，均無DNA殘留。
部分成功樣品：
棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻等等，其中qiagen無法提取的黑加侖、promega無法提取的海棠等、均可用該產品成功提取。
推薦：北京艾德萊生物的RN09 EASYspin 植物RNA提取試劑盒為獨家產品，世界領先水平，不使用苯酚，氯仿有毒性物質，采用離心柱型操作，添加有自主創新的多糖多酚去除成分，是多糖多酚樣品的特效產品，不需要液氮，20分鐘內得到高質量RNA。成功提取Promega無法提取的海棠葉片、Qiagen無法提取的黑加侖等樣品。是國產試劑趕超世界先進水平的一個典型例子。同時北京艾德萊推出的RN38 EASYspin Plus植物RNA提取試劑盒進一步解決了Qiagen的RNeasy plant mini kit 部分植物樣品殘留大量DNA污染的問題，采用了獨創的方法10秒鐘解決殘留問題，是艾德萊生物核酸分離技術遙遙領先的又一個里程碑，處于世界領先水平。
詳情:
RN09 EASYspin 植物RNA快速提取試劑盒 http://www.aidlab.cn/product_view.asp?id=23
RN38 EASYspin plus植物RNA快速提取試劑盒http://www.aidlab.cn/product_view.asp?id=218
RNeasy plant mini kit http://www.qiagen.com/products/rnastabilizationpurification/rneasysystem/rneasyplantmini.aspx
使用本試劑盒已經有大量文章發表，請聯系我們索取發表的文章和包括北京林業大學，北京農學院，中國農業大學，農林科學院果樹研究所，林業所，中國農科院，藥用植物研究所等大學和研究院所大量使用案例。
聯系方式：qq：328153626 maozhang2000@hotmail.com 13691030050
圖片說明：艾德萊EASYspin植物RNA提取試劑盒提取提取棉花老葉和嫩葉RNA電泳圖。圖片來源為山東大學客戶。
圖片說明：艾德萊EASYspin試劑盒提取黑加侖的根，葉片RNA電泳圖，左為黑加侖根，右為黑加侖葉片。圖片來源為中科院動物所客戶。