1. 海馬神經細胞的急性分離方法
將大鼠以20%烏拉坦1g/kg(5ml/kg)麻醉后斷頭,立即取出腦組織并迅速置入低溫人工腦脊液(0℃~4℃)中10~20s,然后于大腦半球腹內側分離出海馬,將海馬切成400μm的薄片,置于人工腦脊液內孵育30 min后,更換為含1g/L胰蛋白酶的人工腦脊液酶解40min。用人工腦脊液沖洗腦片3次后,再將腦片置于人工腦脊液內孵育待用,上述孵育和酶解過程中,溶液需保持在32℃并連續通以5%CO2+95%O2混合氣。最后,將部分腦片移入盛有氧飽和的人工腦脊液的離心管內,先后用尖端經熱處理的直徑為400μm和150μm左右的吸管輕輕吹打,直至單個海馬神經元分離;取上部細胞懸液,加入培養皿內,約20min后細胞貼壁,即可在倒置顯微鏡下觀察細胞形態,并進行膜片鉗記錄。
2. 玻璃微電極的制作
用微電極拉制器將玻璃毛細管分兩步拉制成尖端直徑約為 lμm的微電極;為了提高封接的成功率,可將微電極尖端在顯微鏡下接近拋光儀的熱源進行拋光。然后用注射針從電極尾部充灌電極內液到微電極中備用。
3. 儀器的連接 (見圖1)

4. 高阻抗封接的形成
將分離的大鼠海馬單個細胞置于倒置顯微鏡的浴槽中,待細胞貼壁后,在三維液壓操縱器推進下,使內充電極內液的微電極尖端進入浴液。由膜片鉗放大器向微電極發放一電壓為 10mV、波寬為40 ms的方波脈沖信號,觀察封接形成過程。當微電極尖端與細胞表面接觸后,可見應答電流減小,再向微電極尖端施以負壓,使應答電流進一步減小至零,則形成G歐姆封接。
5. 大鼠海馬神經細胞單通道鈉電流的記錄
在微電極與細胞膜封接電阻達到G歐姆級后,即形成細胞貼附式記錄模式,此時,如給予膜片一個保持電位-120 mV、指令電位-50 mV的刺激,即可以記錄到海馬神經細胞的單通道電流(圖2)。

6. 大鼠海馬神經細胞全細胞鈉電流的記錄
在記錄到單通道電流后,可經微電極給予負壓吸引或電脈沖擊破電極尖端的膜片,使電極內液與細胞內液相通,則形成了全細胞記錄模式,調節快電容補償,抵消電容性尖峰,調節放大器的慢電容補償和串聯電阻補償來抵消瞬態電流。在電壓鉗制模式下,給細胞以如下參數刺激:保持電位為-120 mV,指令電壓-90~-25 mV,脈沖階躍為 10 mV,刺激頻率為 0.5 Hz,持續時間為 40 ms,即可引導出全細胞鈉通道電流(圖22-14)。如在浴液中給予河豚毒(TTX) 50μmol/L或給予I類抗心律失常藥普羅帕酮 20 μmol/L,灌流 10 min后,再給細胞以上述刺激,可觀察到鈉電流幅度的變化。
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