天冬酰胺酶的測定實驗

L-天冬氨酸酰胺水解酶。

L-天冬酰胺＋H₂O → L-天冬氨酸＋NH₃

酶的測定是通過確定 Nessler's 試劑釋放的氨氣來實現的。一個單位的定義：在 37℃、pH 8.6 時，釋放每分鐘 1 umol NH₃ 的酶量。

L-天冬氨酸酰胺水解酶

Tris-HCl L-天冬酰胺溶液 三氯乙酸 Nessler's 試劑

實驗所需「試劑」具體見「其他」

1. 樣品和對照組的溶液：

2. 離心 5 min

0.5 ml 上清

7.0 ml H₂O

1.0 ml Nessler’s 試劑

室溫放置 10 min，記錄 480 nm 吸收值

3. 通過硫酸銨標準曲線定量 NH₃ 濃度。

4. 計算

試劑：

0.05 mol/L Tris-HCl，pH8.6

0.01 mol/L L-天冬酰胺溶液（天冬酰胺，含 1 分子水，Mr＝150.1；150 mg 溶于 100 ml 0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.6）

1.5 mol/L 三氯乙酸（TCA，Mr＝163.4；24.5 g 溶于 100 ml 水中）

Nessler's 試劑