如何選擇流式細胞儀

自七十年代出現第一代流式細胞儀以來，隨著計算機技術、電子制造技術、激光技術及熒光素合成技術的不斷發展，現代流式細胞儀已今非昔比，制造工藝、功能、精確度有了質的飛躍。

流式細胞儀生產廠商推出各種不同型號的流式細胞儀來滿足用戶的不同需要。現生產流式細胞的廠商全球至少有六家，各廠商產品又有不同的系列，各具特點。如何從眾多的型號中挑選出最適合自己的機型，我們還需從分析應用出發，評估自己的需求來決定什么樣的流式細胞儀最具性價比、最適合自己。

⑴、DNA倍體分析

DNA分析是流式細胞儀最初且是現在應用最廣檢測項目。由于惡性細胞DNA含量通常與正常細胞不同，存在異倍體細胞，所以現有很研究評價異倍體細胞與腫瘤惡性度及其預后的關系。DNA含量檢測還可提供細胞周期方面的信息，這在細胞生物學中運用很廣泛。

特別地，它可表示出細胞毒性藥物對細胞作用過程。這些DNA檢測還可與細胞表面標志物標記同時進行，這樣在細胞混合培養中，可通常追蹤表達特異標志物的細胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學反應并發射出熒光，常用的染料為PI，DAPI。

流式細胞儀要求：488nm光源，575nm濾光片。

⑵、細胞生存能力實驗

使用Heochest 33342染料與DNA特異性結合，后因細胞活力不同染料的結合程度也各異，故可評估細胞的活性度。

流式細胞儀要求：360nm光源，455nm濾光片

⑶、計數外周血中檢測網織紅細胞

使用TO染料能夠特異性地與RNA結合，結合系數高達3000，故具有很好的性價比。

流式細胞儀要求：488nm光源，525nm濾光片，液量絕對計數系統

⑷、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細胞計數，臨床上用于骨髓移植前干細胞數理的測定

使用標準ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用FITC通道，PE標記CD34抗體，PE-CY5標記CD45抗體。

流式細胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm、675nm濾光片，液量絕對計數系統

⑸、交叉淋巴細胞、粒細胞毒實驗

檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細胞之間是否存在反應有著重要臨床意義，因為這種反應會導致移植后發熱、移植后肺損傷及免疫性粒細胞缺乏癥。流式細胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細胞上結合的人免疫球蛋白。FITC標記人免疫球蛋白抗體、PE標記粒細胞表面標志物、PE-CY5標記HLA抗體。

流式細胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm、675nm濾光片

⑹、血小板自身抗體檢測

血小板自身抗體識別人血小板抗原，會引起各種臨床相關癥狀，如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細胞可快速準確地檢測血小板自身抗體。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別血小板抗體。

流式細胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm濾光片

⑺、移植交叉配型

原細胞毒實驗，主要用于避免移植物超急性排拆反應。流式細胞儀用于監測T或B細胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊，作為HLA配型前的預實驗。流式細胞儀因其高精確性已成為該領域內的金標準。FITC標記抗人免疫球蛋白抗體、PE標記識別T細胞CD3或B細胞CD29抗體。

儀器要求：488nm光源，525nm、575nm濾光片

⑻、檢測細胞經抗原或細胞有絲分裂刺激后活化效應

淋巴細胞早期活化指標CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細胞使用三色分析可監測淋巴細胞各亞群活化情況：FITC標記的CD3抗體、PE標記的CD8抗體、PE-CY5標記的CD69抗體。

流式細胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm、575nm濾光片