常用的蛋白質含量測定方法有哪些

　①凱氏定氮法
　　原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強堿性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最后用標準酸滴定硼酸，通過標準酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
　　②雙縮脲法
　　原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在堿性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是酰胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
　　缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 準確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
　　③Folin酚法(Lowry)
　　Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當于雙縮脲試劑（堿性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
　　在堿性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
　　靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
　　④紫外法
　　280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
　　280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
　　蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標）
　　⑤色素結合法（Bradford 法）
　　直接測定法：利用蛋白質與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
　　考馬斯亮蘭（CBG）染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑，會在不同的酸堿度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境，因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的CBG也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
　　間接測定法：蛋白質與某些酸性或堿性色素分子結合形成不溶性的鹽沉淀。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
　　⑥BCA法
　　BCA（Bicinchoninc acid procedure，4,4’-二羧-2,2’-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在堿性溶液中，蛋白質使Cu2+轉變Cu+后，進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
　　它的優點在于堿性溶液中BCA 比Folin試劑穩定，因此BCA與堿性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
　　本方法對于陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及EDTA的干擾。
　　⑦膠體金測定法
　　膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，并能與多種生物大分子結合。
　　膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關系，可用于蛋白質的定量測定。
　　⑧其他方法
　　有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。