ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。在此,我們將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結如下:
操作 | 注意問題 | 解決方案 |
加樣 | 1、血清或血漿標本分離不好即進行加樣
2、手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵育箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)
3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外 | 1、標本為血清,最好將血液先自然存放1-2h后,再用3000rmp離心15分鐘,標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱中 2、加樣后及時放入孵箱 3、加酶試劑后用吸水紙在酶標版表面輕拭吸干 4、如果采用AT或其他全自動加樣,最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑 5、酶標本較多,請分批操作 |
孵育 | 1、孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于徹底清洗 2、孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底 | 1、貼封片或加蓋 2、按說明步驟嚴格控制操作時間 |
洗板 | 1、采用手工洗板,孔與孔之見液體交叉 2、采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差 3、反應板過多造成洗板等待時間長 | 1、保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后最好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干
2、合理安排,或多用幾臺洗板機 |
顯色 | 1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑 2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流 | 1、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用 2、加樣時保持顯色劑不外流 3、A、B液應避免接觸金屬器械 |
終止 | 加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加 | 加終止液時應避免產生氣泡 |
讀板 | 讀板時板底不清潔 | 應保持酶標板清潔 |
全過程 | 1、整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸 2、實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量 |
實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時做好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測治理。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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