微生物學技術：病毒的雞胚培養

一、目的要求

掌握雞胚尿囊腔接種培養新城疫病毒的操作技術。

二、器材

1.雞胚 應選用健康雞群的受精蛋，接種雞的雞胚應無母源抗體，以免影響病毒在胚胎中的增殖。實驗用的雞胚多采用9—10日齡的活胚。

2.接種材料 新城疫I系疫苗

3.各種器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml結核菌素注射器、41/2號注射針頭、鑷子、3%碘酊、75%酒精棉球、鉛筆、酒精燈、剪刀、眼科鑷子、滅菌的疫苗瓶、滅菌滴管和固體石蠟等。

三、內容和方法

（一）接種前的準備

1.雞胚的準備

本實驗選擇9—10日齡的雞胚，在照蛋時以鉛筆勾劃出氣室，于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區域中，在血管之間的間隙劃上記號，作為接種部位；用0、 1%新潔爾滅把蛋殼搽洗干凈并抹干，再以2%碘酊對接種部位進行消毒，用75%酒精再擦一遍，在接種定位出打孔，氣室向上豎放于蛋架上。

2.病毒接種材料的準備

要分離培養的病毒材料應是無菌的，因此為達到材料無菌的目的，可在每ml接種物質中加青霉素和鏈霉素各100—500IU，置室溫中1小時或冰箱中12—24小時處理。或經濾器除菌。

（二） 接種

絨毛尿囊腔內注射：用6號針頭的1ml注射器吸取新城疫病毒材料，針頭從已打好的小孔中向雞胚方向插入0.5—-1cm,注入0、1ml （相當0、5羽份），再加氧化鋅膠布貼封，再加融化的固體石蠟封口，放回孵化箱中進行孵化，每天翻蛋兩次，照視一次，24小時內死亡的舍去。

（三）收獲

新城疫I系病毒材料，在接種24—48小時即可收獲。收獲前應將雞胚 置4度冰箱冷藏4小時或過夜，以免解剖時血管破裂。碘酒消毒蛋殼，用鑷子去卵殼和尿囊膜，用吸頭吸尿囊液于瓶內，可收集5-8ml，無菌檢查，冰凍保存。