液體稀釋法
在一組試管中分別加入一定的培養基，然后加入不等量的被測物質，再將已培養好的、用于測定的微生物接種進去,在規定的條件下培養一定時間,觀察其消長情況并與標準曲線對比，計算出被測物質的含量。
固體平板擴散法
將溶化的固體培養基與被測定微生物混合做成平板，把含不等量被測物質的液體滴入置于平板上(直接滴樣法)；或注入平板上的牛津杯內（管碟法）；或吸入圓形濾紙片后，再置于平板上(紙片法)；也可以在平板上挖一定大小的圓孔，然后把被測物滴入孔內（打孔法）；經培養后在物質擴散所及的范圍內出現抑菌法（或生長圈）,測量圈的直徑,并與標準曲線對比,計算出被測物質的含量（見圖[固體平板擴散法 1、3、7 打孔法 2、8紙片法 4、6管碟法 5直接滴樣法][]）。
1932年，A.弗萊明在研究溶菌酶和青霉素時，開始使用微生物法測定抗生素的活性。1940年，E.B.錢恩等根據平板上抑菌圈的大小測定青霉素的活性含量。后又經E.P.亞伯拉罕等進一步將上述測定方法予以完善。測定抗生素時常用的微生物有大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母、黑曲霉等。1935年，W.H.肖普費最先用微生物測定維生素B。1939年,E.E.斯內爾和F.M.斯特朗用乳桿菌測定維生素的含量。1934年，K.A.凱肯等用阿拉伯聚糖乳桿菌測定9種氨基酸。此后,乳桿菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬的成員及某些微生物的變異株，逐漸成為最常使用的對象。[1]