實驗概要
本實驗介紹了用超速離心沉淀法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。
主要試劑
1. 70%乙醇
2. 20%的蔗糖溶液
3. PBS緩沖液
主要設備
1. Ultra-clear SW28離心管
2. 超凈工作臺
3. 紫外燈
4. 10ml移液管
5. Beckman SW28 超速離心轉頭
6. 高速離心機
7. 50ml錐底離心管
8. 低溫冰箱
實驗步驟
1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。
2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部，緩慢將蔗糖溶液打出4 ml。同樣地，將剩下8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個離心管中。另取一支干凈的移液管，對剩下3管進行同樣處理。
4. 用PBS調整各管的重量，使對應的離心管之間的重量相差不超過0.1g。
5. 按次序將所有6個離心管放入Beckman SW28 超速離心轉頭中。
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 離心2小時。
7. 小心將管子從轉頭中取出。倒掉上清，將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應當有可見的沉淀。
8. 每管中加入100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀。
9. 將SW28超速離心管插入到50ml錐底離心管中，蓋上蓋子。
10. 在4℃溶解2小時，每隔20分鐘輕輕震蕩。
11. 4℃，500g離心1分鐘，使溶液集中于管底。
12. 用200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產生泡沫。將所有管中的液體集中到一個SW28離心管中。
13. 集中后的病毒懸液分裝成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃。
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