戊型肝炎抗IgM定性檢測作業指導書

1.檢驗目的
HEV所致戊型肝炎的臨床癥狀和流行病學特點和甲型肝炎相似，是一種自限性急性肝炎。孕婦感染HEV有較高的重癥肝炎發生率。抗HEV抗體檢測所用抗原為合成多肽或克隆表達的融合蛋白，抗原序列多選自基因開放讀碼框架ORF2和ORF3區。抗HEV抗體IgM陽性表示急性期感染，在潛伏末、出現臨床癥狀之前即可檢測到，并在癥狀最典型期達到峰值，持續時間約1個月。抗HEV抗體IgM產生不久，即可檢測到抗HEV抗體IgG，并緊隨抗HEV抗體IgM之后達到峰值，持續約1年。對HEV感染的確診還可結合其他相關手段，如酶免疫印跡技術、HEV RNA檢測等。
2.方法原理
采用 ELISA架橋法：用抗人μ鏈抗體包被微孔板，以捕捉待測血清中IgM，再加HEV抗原（HEVAg）與特異性IgM反應，最后加酶抗HEV抗體，使底物呈色。
3.性能指標
此方法快速簡便、特異性強、檢測靈敏度度0.5ng/ml。
4.標本收集
4.1標本類型：靜脈血或動脈血的血清或血漿標本均可作為檢測標本（抗凝劑可用肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝劑的質量應符合化試藥品要求——化學純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準）；其他體液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測標本，但加熱滅活的血清和血庫的庫存血則不宜作為檢測標本。
4.2標本留取：以空腹為宜，收到標本后最好立即離心留取血清或血漿（凝固血應待其充分凝固后收集血清），不能有殘留的紅細胞、纖維蛋白絲，使用肝素治療的病人宜在肝素治療前抽血。
4.3標本保存：留取的標本最好在3小時內檢測，不能立即檢測的應放置于2-8℃最長達14天（可以含有凝塊但要密閉以防蒸發），或者-10℃最長達14天（不能反復凍融也不能含有凝塊和紅細胞）。
4.4標本容器：盛放標本的容器必須為潔凈的一次性真空采血管、玻璃試管、一次性的不同規格的塑料離心管
4.5標本外送：如涉及到需要外送的標本，必須以規定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據郵寄規則和要求進行包裝，運送時還要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由專人運送至指定地點指定接收人。
4.6拒收標本：凡與4.1-4.5所述內容不符的標本，檢驗人員應向臨床或就診者說明拒收標本的原因，并提出解決的方案或建議。
5.分析系統
5.1分析儀器：為美國BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶標儀，儀器校準請參見儀器操作規程。
5.2分析試劑：為珠海麗珠集團提供的配套的HEV抗原試劑盒，規格為48test/盒，2-8℃貯存，有效期12個月；在效期內使用試劑。
5.3質控試劑：為珠海麗珠集團提供的配套的HEV抗原試劑盒中所附帶的陰、陽性對照，2-8℃貯存，有效期12個月每月一次質控小結，失控要有記錄及糾正的結果。
6.操作方法
6.1樣品孔加入待測血清50μl。
6.2封板，置37℃孵育30分鐘。
6.3手工洗板：棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。
6.4每孔加入酶標抗體1滴，置37℃孵育20分鐘。
6.5手工洗板：棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。
6.6每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃ 孵育才10分鐘。
6.7每孔加入1滴終止液終止顯色反應。
6.7用酶標儀讀數，數值取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。
7.質量控制操作程序
7.1每次實驗設陰性、陽性各2孔，并設空白對照1孔隨常規標本一起檢測。
7.2質控結果登記到本年度的“免疫室定性檢測項目室內質控登記表”。 
7.3一旦發現失控，應即時查找和分析原因，并在該結果欄作詳細的批注和記錄解決的過程；失控情況處理及原因分析詳見8“失控處理”。
7.4每月進行質控小結。并將原始數據打印和存盤留檔。
8.失控處理操作程序
8.1失控情況處理：操作者在分析質控結果時，如發現質控違背了控制規則，應填寫失控報告單，上交專業室主管（組長），由專業室主管（組長）做出