我國學者通過RIGI敲除293T細胞獲得有效的干擾素敏感疫苗

　　甲型流感病毒感染嚴重威脅全球公共健康并造成重大經濟損失，而疫苗仍是防控流感最有效的手段。干擾素敏感（IFN -sensitive）和復制缺陷（replication-incompetent）流感疫苗因其在正常細胞中無法進行有效復制，卻能夠誘導機體產生強烈的免疫反應而備受關注，這類疫苗被認為將很有可能替代傳統的滅活疫苗和減毒疫苗。非結構蛋白1（NS1）是甲型流感病毒的致病因子之一，在病毒的生命周期中發揮著多種重要作用，尤其是能夠通過抑制RIG-I介導的I型IFN的產生來拮抗宿主的天然免疫反應。IFN敏感疫苗正是利用這一理論依據，將流感病毒的IFN拮抗功能去除，從而抑制病毒在體內的有效復制。目前主要使用IFN-α/β缺陷的Vero細胞或IFN功能低下的低日齡SPF雞胚來繁殖此類疫苗病毒，但仍然無法滿足此類疫苗病毒的生產需求。

　　劉文軍課題組長期從事流感病毒的復制調控機制研究，前期圍繞流感病毒NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫反應的機制開展了系列研究工作（Journal of Virology,2016,90:6263– 6275；Cellular Microbiology,2017,19(2),e12643）。而該研究則利用NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫的功能，制備了有限復制流感疫苗并建立了生產該類疫苗的細胞系。

　　該研究利用反向遺傳技術在RIG-I敲除的293T細胞中成功包裝出NS1蛋白38位和41位氨基酸雙突變（NS1 R38A/K41A）的重組流感病毒，其包裝效率要遠遠高于其在野生型293T細胞中的效率。并且，該重組病毒幾乎喪失了IFN拮抗功能，在MDCK、A549甚至IFN-α/β缺陷的Vero細胞中傳3-6代后即被細胞清除。為了能夠大量生產此類有限復制的IFN敏感流感病毒，該團隊利用Tet-On 3G系統建立了穩定表達野生型NS1蛋白的Vero細胞系，NS1 R38A/K41A病毒在該細胞系上能夠穩定傳20代以上并保持較高的病毒滴度。動物實驗表明，NS1 R38A/K41A病毒能夠感染小鼠并誘導強烈的天然免疫和獲得性免疫，并抵抗A/WSN/33 (WSN)、A/Puerto Rico/8/1934 (PR8)和 A/California/04/2009 (CA04)流感病毒的再次攻擊，但NS1 R38A/K41A病毒的致病力幾乎喪失，并很快被排出體外。

　　綜上所述，RIG-I敲除的293T細胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的包裝，穩定表達NS1的Vero細胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的有效復制，該系統可以用于包裝并生產有限復制的IFN敏感疫苗病毒。NS1 R38A/K41A流感病毒在正常細胞和小鼠體內的復制是有限的，是一種潛在的安全有效的干擾素敏感疫苗。

　　上述研究于2018年5月1日在線發表在 Frontiers in Cellular and Infection Microbiology上。該研究得到國家重點研發計劃、國家自然科學基金及中國科學院B類先導科技專項等項目的資助。

Immunogenicity and protective efficiency of the NS1 R38A/K41A virus. Sera of WT or NS1 R38A/K41A virus infected mice (n = 6) was collected at 3, 7, and 14 d p.i.