掃描電鏡樣本的干燥

掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液，在高真空中都會產生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會破壞樣品的微細結構。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進行干燥。干燥的方法有以下幾種：

1) 空氣干燥法
空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將經過脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發干燥。這種方法的最大優點是簡便易行和節省時間；它的主要缺點是在干燥過程中，組織會由于脫水劑揮發時表面張力的作用而產生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較為堅硬的樣品。

2) 臨界點干燥法
臨界點干燥法是利用物質在臨界狀態時，其表面張力等于零的特性，使樣品的液體完全汽化，并以氣體方式排掉，來達到完全干燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響，較好地保存樣品的微細結構。此法操作較為方便，所用的時間也不算長，一般約2～3小時即可完成，所以是最為常用的干燥方法。但用此法， 需要特殊儀器設備。臨界點干燥是在臨界點干燥儀中進行的，操作步驟如下：
a．固定、脫水：按常規方法進行。如樣品是用乙醇脫水的，在脫水至100%后，要用純丙酮置換15～20分鐘。
b．轉入中間液：由純丙酮轉入中間液醋酸異戊酯中，時間約15～30分鐘。
c．移至樣品室：將樣品從醋酸異戊酯中取出，放入樣品盒，然后移至臨界點干燥儀的樣品室內，蓋上蓋并擰緊以防漏氣。
d．用液體二氧化碳置換醋酸異戊酯：在達到臨界狀態(31℃, 72.8大氣壓)后，將溫度再升高10℃，使液體二氧化碳氣化，然后打開放氣閥門，逐漸排出氣體，樣品即完全干燥。

3) 冷凍干燥法
冷凍干燥法是將經過冷凍的樣品置于高真空中，通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。冷凍干燥的基礎是冰從樣品中升華，即水分從固態直接轉化為氣態，不經過中間的液態，不存在氣相和液相之間的表面張力對樣品的作用，從而減輕在干燥過程中對樣品的損傷。冷凍干燥法有兩種，即含水樣品直接冷凍干燥和樣品脫水后冷凍干燥。

a．含水樣品直接冷凍干燥法

取材固定：按常規方法進行。

置于冷凍保護劑中：

        將樣品置于冷凍保護劑中浸泡數小時。常用的冷凍保護劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%～40%甘油水溶液。

驟冷：

         將經過保護劑處理的樣品迅速投入用液氮預冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結。

干燥：

        將已凍結的樣品移到冷凍干燥器內已預冷的樣品臺上，抽真空，經幾小時或數天后，樣品即達到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機溶劑對樣品成分的抽提作用，不會使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由于花費時間長，消耗液氮多，容易產生冰晶損傷，因此未被廣泛應用。

b．樣品脫水后冷凍干燥
         樣品用乙醇或丙酮脫水后過渡到某些易揮發的有機溶劑中，然后連同這些溶劑一起冷凍并在真空中升華而達到干燥。和前一種方法比較，本方法的優點是不會產生冰晶損傷，且干燥時間短。不足之處是有機溶劑對樣品成分有抽提作用，造成部分內含物丟失。乙腈(acetonitrile)真空干燥法：這是一種利用乙腈在急速蒸發時會冷卻固化的性質將樣品干燥的方法。其操作步驟如下：

固定、水洗：按常規方法進行。

乙腈置換：

         使用50%-70%-80%-90%的乙腈水溶液置換，最后用100%乙腈代替，每步驟15～20分鐘。

干燥：

         至純乙腈時，放入真空鍍膜臺抽真空，乙腈和樣品在真空中很快致冷而被凍結(凍結的溫度為(45℃)，變成冰狀固體。然后繼續抽真空，使凍結的乙腈升華，約需30分鐘，樣品即達干燥。
樣品干燥后要粘在樣品臺上。對于不鍍膜而直接觀察的樣品，必須用導電膠來粘固；對于要鍍膜的樣品，則可以用膠水或萬能膠來代替，微細的樣品如粉末、纖維等也可用雙面膠紙來粘貼。