抗核抗體檢測的臨床應用專家共識（一）

抗核抗體(antinuclear antibodies，ANA)作為自身免疫病(autoimmune diseases，AID)重要的生物學標志，是臨床應用中最廣泛、最基礎的一組自身抗體。

1957年Holborow等建立間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence，IIF)檢測ANA，對ANA檢測的臨床應用具有里程碑意義。臨床上ANA常見于系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)等系統性(非器官特異性)AID患者，也可見于器官特異性AID患者，如自身免疫性肝病等。除此之外，ANA還可出現于慢性感染性疾病、腫瘤及健康人群中。檢測ANA對AID的診斷、鑒別診斷、分型及疾病活動性監測等具有重要的臨床意義。

ANA檢測的標準化對ANA的臨床應用非常重要。2014年歐洲自身免疫標準化促進會和自身抗體標準化委員會共同發表了《抗核抗體檢測的國際建議》。2014年8月在第12屆自身抗體和自身免疫國際研討會議上，形成ANA熒光模型國際共識(international consensus on antinuclear antibody pattern，ICAP)，提出關于ANA熒光模型標準化分類命名的第一個國際共識。2014年中國免疫學會臨床免疫學分會發布了《自身抗體檢測在自身免疫病中的臨床應用專家建議》。2015年9月在ICAP第二次會議上形成了ANA檢測結果報告方式國際共識。2016年國內自身抗體檢測領域專家對ANA熒光模型國際共識和檢測結果報告方式國際共識在國內首次進行詳細解讀。

雖然上述國際、國內專家建議及共識對規范ANA的檢測及明確其臨床應用具有重要的意義，但目前尚缺乏適合我國國情的ANA檢測的臨床應用共識供臨床及實驗室遵循。因此，中國醫師協會風濕免疫科醫師分會自身抗體檢測專業委員會于2017年9月組織了國內風濕免疫科、腎內科、健康體檢、臨床實驗室及第三方檢測實驗室等多學科專家召開本共識的啟動會。根據啟動會提出的要求，由8位專家根據國內外相關文獻并結合國內實際情況及中國的ANA檢測臨床經驗分別獨立起草共識草案，隨后對草案進行討論匯總形成共識初稿。共識初稿經召開專家討論會由所有專家組成員逐條審議討論，達成一致意見后形成本共識。本共識的制定，旨在提高我國臨床實驗室對ANA檢測的臨床應用范圍、臨床意義解讀等方面的認識水平，規范我國ANA檢測方法、結果判斷及結果報告，為臨床提供規范可靠的ANA檢測結果，以及ANA檢測臨床意義的正確理解和合理解釋。

ANA的定義

由于細胞核是ANA靶抗原所在的最重要的結構部位，傳統意義上的ANA指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱。隨著ANA檢測技術的改進，尤其是培養細胞抗原基質(如HEp-2細胞)的廣泛應用，對ANA的認識已不僅局限于抗細胞核成分的自身抗體。ANA針對的靶抗原成分已由細胞核擴展到整個細胞成分，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架及細胞分裂周期蛋白等。目前ANA定義是以真核細胞的各種成分為靶抗原的自身抗體總稱。

建議1 ANA定義：以真核細胞的各種成分為靶抗原的自身抗體總稱。

ANA檢測的臨床應用范圍

ANA作為AID重要的生物學標志，常見于SLE、干燥綜合征(Sj?gren′s syndrome，SS)、系統性硬化癥(systemic sclerosis，SSc)、混合性結締組織病(mixed connective tissue disease，MCTD)及多發性肌炎(polymyositis，PM)/皮肌炎(dermatomyositis，DM)等系統性(非器官特異性)AID患者。同時，ANA可見于器官特異性AID患者，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲狀腺炎等。除此之外，ANA也可見于慢性感染性疾病、腫瘤及健康人群中。因此，對臨床疑似AID患者，特別是多器官受累的系統性(非器官特異性)AID患者檢測ANA及針對靶抗原的特異性自身抗體。例如：原因未明的發熱、皮膚病變(蕁麻疹、紅斑等)、關節肌肉受累(晨僵、關節痛、關節炎、肌肉無力、肌肉痛等)、眼部病變(累及角膜、視網膜、葡萄膜等)、肺部病變(胸腔積液、肺炎、肺出血等)、消化系統病變(胃腸道出血、穿孔、腸梗阻、黃疸、肝脾腫大、口腔潰瘍等)、心血管系統病變(心肌、心內膜、傳導系統等)、血液系統病變(溶血性貧血、白細胞減少、血小板減少等)、腎臟病變、神經病變、精神受累、全身不適、體重下降、淋巴結腫大、雷諾征、脫發等。

健康體檢人群中ANA陽性率高達11.27%，大部分為生理性自身抗體。但是，ANA也可見于某些AID患者的臨床前期，如ANA及其針對靶抗原的特異性自身抗體[抗干燥綜合征抗原A (Sj?gren′s syndrome antigen A，SSA)抗體、抗干燥綜合征抗原B (Sj?gren′s syndrome antigen B，SSB)抗體等]可在SLE、SS患者出現臨床癥狀前數年檢測到。ANA檢測在AID患者早期預測中的應用已成為近年來ANA臨床應用的新進展。因此，ANA檢測也可用于高危人群的健康體檢篩查，如育齡期女性、AID患者的直系親屬、處于易誘發AID的環境及免疫功能異常者等。

建議2　推薦臨床疑似AID患者，特別是多器官受累的系統性(非器官特異性)AID患者檢測ANA及其針對靶抗原的特異性自身抗體。

建議3　ANA檢測可用于高危人群的健康體檢篩查，如育齡期女性、AID患者的直系親屬、處于易誘發AID的環境及免疫功能異常者等。

ANA檢測方法

ANA的檢測方法包括IIF法、ELISA等多種免疫學方法。以HEp-2細胞為實驗基質的IIF法是進行ANA檢測的參考方法和首選方法。雖然ELISA等其他方法也可以使用，但需注意這些方法的敏感性和特異性存在差異。因此，如果臨床高度懷疑ANA相關AID而其他方法檢測ANA結果陰性時，必須采用IIF法重新檢測ANA。

采用以HEp-2細胞為實驗基質的IIF法進行ANA檢測時，HEp-2細胞在實驗基質中每顯微鏡視野(放大倍數為200倍)應可見3～5個有絲分裂細胞；二抗應使用熒光素標記的抗人IgG抗體。另外，IIF法檢測ANA的稀釋方法可根據不同的檢測試劑而采用倍比稀釋系統或稀釋系統。IIF法檢測ANA的準確性與試劑、設備、實驗人員操作和結果判讀及其他因素有關。因此臨床實驗室進行ANA檢測時應有完善可靠的室內質控和室間質評體系，確保實驗檢測結果的準確性。如IIF-ANA的室內質控應包括典型熒光模型(如細胞核均質型、細胞核斑點型、細胞漿型等)的高、中、低滴度的陽性質控品和陰性質控品。陽性質控品結果在上下1個滴度內，陰性質控品結果為陰性時表明該次實驗在控。IIF法檢測ANA的自動化是今后的發展趨勢，此類自動化儀器不僅包括實驗操作的自動化(前處理)，也包括實驗結果判讀的自動化。IIF-ANA自動化對ANA陰/陽性判讀具有較高的診斷效能，對典型的ANA熒光模型和滴度有較好的識別能力，能提高實驗室IIF法檢測ANA的工作效率和檢測結果的一致性。

ANA特異性自身抗體可采用多種免疫學方法檢測，不同的檢測方法具有不同的臨床應用優缺點。如ELISA具有高敏感性、定量及易自動化的優點，但需對每個自身抗體進行逐項檢測。線性免疫印跡法(line immunoassay, LIA)具有高敏感性、易操作、易自動化及一次實驗操作可同時檢測多種自身抗體的優點，但其檢測結果為半定量，某些自身抗體的特異性偏低。化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)具有高敏感性、高特異性、定量及自動化的優點，但檢測成本高、需對每個自身抗體進行逐項檢測。

抗雙鏈DNA(double stranded DNA, ds-DNA)抗體檢測使用綠蠅短膜蟲為實驗基質的IIF法、ELISA和放射免疫法。IIF法和放射免疫法具有較高的臨床特異性，若其他方法檢測抗ds-DNA抗體陽性與臨床表現不符合時，建議采用IIF法或放射免疫法進行進一步確認。對SLE的疾病活動性進行監測時，應定期使用同種定量檢測方法進行抗ds-DNA抗體的檢測。

ANA檢測分成ANA總抗體的檢測和針對靶抗原的特異性自身抗體檢測。通常在ANA的臨床應用中可先用IIF法進行ANA檢測，若結果為陽性，需進一步進行ANA針對靶抗原的特異性自身抗體檢測，為疾病確診提供依據。但由于不同方法存在靶抗原表位、敏感性及特異性差異，造成ANA總抗體的檢測和針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結果的不一致。臨床檢測中存在IIF-ANA陽性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結果陰性，甚至IIF-ANA陰性而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結果陽性的情況。因此，當臨床高度疑診AID時，不論ANA總抗體的檢測結果如何，都需要對針對靶抗原的特異性自身抗體進行檢測。