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    發布時間:2020-06-22 19:53 原文鏈接: 改善記憶作用檢驗方法(一)

    1動物實驗 
    1.1跳臺實驗 
    1.1.1原理 
    反應箱底鋪有通36v電的銅柵,動物受到電擊,其正常反應是跳上箱內絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺,如此訓練5min,并記錄每鼠受到電擊的次數或叫錯誤次數,以此作為學習成績。24h或48h重作測驗,此即記憶保持測驗。記錄受電擊的動物數、第一次跳下平臺的潛伏期和3min內的錯誤總數。停止訓練5天后(也可以在訓練后的一周、兩周或其它時間點)進行記憶消退實驗。 
    1.1.2儀器與試劑 
    跳臺儀:該裝置為10×10×60cm3的被動回避條件反射箱,用黑色塑料板分隔成5間。底面鋪以銅柵,間距為0.5cm,可以通電,電壓強度由一變壓器控制。每間左后角置一高和直徑均為4.5cm的絕緣平臺。 
    試劑:樟柳堿、環已酰亞胺、乙醇。 
    1.1.3實驗方法 
    1.1.3.1實驗動物 斷乳鼠,體重10g左右;或成年鼠,體重18-22g用于改善老年人記憶的產品必須采用成年鼠。雌雄均可,單一性別不少于10只(最后有效數據)。推薦使用近交系小鼠。 
    1.1.3.2劑量設計和分組 
    共設高、中、低、對照四個組,根據推薦的人體每日每公斤體重攝入量,擴大10倍作為其中一個劑量組,根據受試樣品的具體情況另設兩個劑量組。經口給樣。原則上連續給樣30天,也可根據實驗需要自行設定給樣期限。 
    1.1.3.3實驗方法及步驟 
    1.1.3.3.1受試樣品對正常小鼠記憶的影響 
    末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓練。將動物放入反應箱內(臺上、臺下)適應環境3min,然后將動物放置反應箱內的銅柵上,立即通以36v的交流電。動物受到電擊,其正常反應是跳回平臺(絕緣體),以躲避傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊又迅速跳回平臺上。訓練一次后,將動物放在反應箱內的平臺上,記錄5min內各鼠跳下平臺的錯誤次數和第一次跳下平臺的潛伏期,以此作為學習成績(記憶獲得)。24或48h后進行重測驗,將小鼠放在平臺上,記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期、各鼠3min內電擊次數和受電擊的動物數總數,同時計算出現錯誤反應的動物的百分率(受電擊的動物數占該組動物總數的百分率)(記憶鞏固)。停止訓練5天后(包括第5天)可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗(記憶再現,方法同重測驗)。 
    1.1.3.3.2受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響 
    1.1.3.3.2.1模型制造 
    記憶獲得障礙模型制造:訓練前10min腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿5mg/kg體重; 
    記憶鞏固障礙模型制造:訓練前10min腹腔注射環已酰亞胺120mg/kg體重; 
    記憶再現障礙模型制造:重測驗前30min灌胃30%的乙醇0.1mL/10g體重; 
    1.1.3.3.2.2記憶測試的操作方法:同1.1.3.3.1 
    1.1.4數據處理及結果判定 
    潛伏期結果為計量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F值,F值 錯誤次數和3min內跳下平臺的動物均為記數資料,可用X2檢驗,四格表總例數小于40,或總例數等于或大于40但出現理論數等于或小于1時,應改用確切概率法。 
    若受試樣品組與對照組比較,潛伏期明顯延長,錯誤次數或跳下平臺的動物明顯少于對照組,差異有顯著性,以上三項指標中,任一階段(記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現)的任一項指標陽性,均可判定該項實驗陽性。 
    1.1.5注意事項 
    1.1.5.1動物在24h內有其活動周期,不同時相處于不同的覺醒水平,故每次實驗應選擇同一時間(上午8-12點或下午1-4點),前后2天的實驗要在同一時間內完成。 
    1.1.5.2實驗應在隔音,光強度和溫、濕度適宜且保持一致的行為實驗室進行。 
    1.1.5.3推薦使用純系動物,實驗前數天將動物移至實驗室以適應周圍環境。 
    1.1.5.4實驗者必須每天與動物接觸,如:喂水、喂食和撫摸動物。 
    1.1.5.5減少非特異性干擾,如情緒、注意、動機、覺醒、運動活動水平、應激和內分泌等因素。 
    1.1.5.6考慮動物種屬差異。 

    1.2避暗法 
    1.2.1原理 
    利用小鼠嗜暗的習性設計一個裝置,一半是暗室,一半是明室,中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵,并與一計時器相連,計時器可自動記錄潛伏期的時間。小鼠進入暗室即受到電擊,計時自動停止。 
    1.2.2儀器和試劑 
    避暗儀:該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm,其上方約20cm處懸一40w鎢燈絲。暗室較大,大小17cm×4.5cm,兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電,電擊強度可在一旋鈕上任意選擇。一般40v電壓。暗室與一計時器相連,計時器可自動記錄潛伏期的時間。 
    試劑:樟柳堿、環已酰亞胺、乙醇。 
    1.2.3實驗方法 
    1.2.3.1實驗動物 同1.1.3.1 
    1.2.3.2劑量設計和分組 同1.1.3.2 
    1.2.3.3實驗方法及步驟 
    1.2.3.3.1受試樣品對正常小鼠記憶的影響 
    末次給樣后次日(或一次給樣后1h)開始訓練。實驗時將小鼠面部背向洞口放入明室,同時啟動計時器。動物穿過洞口進入暗室受到電擊,計時器自動停止,取出小鼠,記錄每鼠從放入明室至進入暗室遭電擊所需的時間,此即潛伏期,訓練5min,并記錄5min內的電擊次數(記憶獲得)。24h或48h后重作測驗,記錄每只動物進入暗室的潛伏期和5min內的電擊次數,并計算5min內進入暗室(錯誤反應)的動物百分率(記憶鞏固)。停止訓練5天后可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗(記憶再現)。 
    1.2.3.3.2受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響: 
    1.2.3.3.2.1模型制造:方法同1.1.3.3.2.1 
    1.2.3.3.2.2操作方法:同1.2.3.3.1 
    1.2.4數據處理及結果判定 
    潛伏期時間為計量資料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F值,F值 5min內進入暗室的次數和5min內進入暗室的動物數均為計數資料,可用X2檢驗,四格表總例數小于40,或總例數等于或大于40但出現理論數等于或小于1時,應改用確切概率法。 
    若受試樣品組小鼠進入暗室的潛伏期明顯長于對照組,5min內進入暗室的錯誤次數或5min內進入暗室的動物數少于對照組,且差異有顯著性,以上三項指標中任一階段(記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現)的任一項指標陽性,均可判定該項實驗陽性。 
    1.2.5注意事項:同1.1.5

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