第一部份：時間分辨的原理、我國乙肝兩對半的流行情況及時間分辨在乙肝兩 對半上 的應用技術
一、時間分辨熒光分析（ Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA ）的基本原理。
TRFIA 是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如 銪 （ Eu3+ ）、 鋱 （ Te3+ ）及釤（ Sm3+ ）、 鏑 （ De3+ ）等代替傳統的熒光物質、放射性同位素、酶和化學發光物質，來標記抗體、抗原、多肽、激素、核酸探針或生物活性細胞，待反應體系（如抗原抗體免疫反應、生物素（鏈）親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等）發生后，用時間分辨熒光儀測定最后產物中的熒光強度，根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。
運用稀土離子及其螯合劑作為標記物，被激發的熒光有以下特點：
1、與普通的熒光比較，稀土離子螯合物熒光的衰變時間長，為傳統熒光的 103 ～ 106 倍。從而可以通過延緩測量時間，讓短壽命熒光衰變掉后，再測量目標樣品，這樣可以最大限度地克服來自樣品、試劑的自然本底短壽命熒光（通常為 120nS ）及散射光的干擾，大大提高檢測的靈敏度。
2、激發光與發射光的 Stokes 位移大，可以達到 200 多 nm ，而普通熒光物質的 Stokes 位移最多也只有幾十納米。這表明，在某一波長測定樣品熒光時，可以通過非常簡單的方法（如使用濾波片或分光計），就可消除激發光和散射光的干擾；同時，被激發的熒光光帶極窄，熒光的發射 峰非常 尖銳，可使儀器調整在極窄的波長范圍內測定，極大地降低了來自背景的各種干擾。
3、標記物為原子標記，體積很小，標記后不會影響被標記物的空間立體結構，這既保證了被檢物質的穩定性（尤其對蛋白質影響更小），又可實現多位點標記。標記物穩定，就可以對標記物進行多次激發，通過對每次激發的熒光信號累加后（如激發測量 1000 次）取平均值的辦法，可以大大減少偶然誤差的產生，提高檢測的準確度；同時多位點標記技術，不僅使檢測更靈敏，也可使用雙標記技術使一個試劑盒能夠同時檢測出兩種或兩種以上的項目。
TRFIA 技術集酶標記、同位素標記技術的優點于一身，具有靈敏度高、特異性強、穩定性好、標記物制備簡便、儲存時間長、無放射性污染、檢測重復性好、操作流程短、標準曲線范圍寬和應用范圍廣泛等優點，成為繼放射免疫分析之后，標記免疫分析法發展的一個新的里程碑，被稱之為 " 零本底 " 的檢測方法。其靈敏度大大地超過了放射性同位素（如表 1 所示），是目前配基結合分析中最有發展前途的一項 生化超 微量檢測手段，非常適用于生物學、醫學上的超微量分析。
表 1 常見標記免疫學比較
二、乙肝在我國的流行情況：
慢性乙型病毒性肝炎（ Chronic Viral Hepatitis B,CH-B ）是一種嚴重危害人類健康的疾病，我國是病毒性肝炎的高發區，乙型肝炎病毒（ HBV ）感染率高達 57.63% ，即全國至少有 6 億人感染過 HBV 。現在乙肝病人達 2700 萬，且每年新發病例近 1000 萬， HbsAg 陽性率 9.75% ，約有 1.2 億人，占全球的 1/3 ，其中約 1/4 將發展為慢性肝病，部分患者可發展為肝硬化，甚至演變為肝癌。據統計每年有 23.7 萬人死于乙型肝炎相關的疾病，其中有 15.6 萬人死于肝癌。大概有 5%-10% 的成年人和 70%-90% 的嬰兒受感染后未能完全清除病毒而成為長期帶病毒者，同時亦成為傳播根源。
乙型肝炎血清學標志物為檢測乙肝病毒感染的最主要病原標志和直接證據之一。在病毒感染緩解和愈合的不同時期，可有不同的存在模式。常見模式乙肝五項指標的臨床意義如下：
表 2 常見模式乙肝五項的臨床意義
除上述常見模式外，還存在一些非常規模式，包括 HBsAg 與 HBsAb 同時存在的模式。 ( 只在現在 HbsAg 1 μ g / L 以下的人群中 ) 推測二者同存的原因可能是 HBV 發生變異引起 [2] ；近年來亦有發現 HBeAg 可以與 HBeAb 共存的模式，在慢性乙型肝炎伴活動期肝損傷時，幾乎 100% 為 HbeAg 、 HBeAb 共存。因之，對乙肝血清標志物的測定對臨床有著極其重要的價值。
近年來醫學臨床和預防的要求對低水平存在的血清學標志物進行有效檢測，具有更重要的臨床和流行病學意義。研究證實，在部分 HBV 感染的人群中，血清表面抗原呈低水平存在，容易造成漏檢。尤其是目前普遍采用的酶標檢測方法，對低水平人群更容易造成漏檢。在較大范圍的非肝炎患者住院人群的檢測結果表明，血清 HBsAg 約在 5 μ g/L 以下者占總人群的 2.34% ；占 HBsAg 陽性人群的 23.16% ，其中， HBsAg 濃度在 1 μ g/L 以下的占多數（ 44.40% ） [2] 。多方面研究表明，低水平血清 HBsAg 人群占有不小的比例，尤其我國是乙肝的高發區，加之人口眾多，此類人群不容忽視。由于檢查方法上的不靈敏，還可導致乙肝病毒通過手術，輸血等途徑發生傳播等嚴重后果。因此，進一步提高血清 HBsAg 檢測的靈敏度有重要意義。
三、時間分辨技術定量檢測乙肝兩對半的重大意義
運用 TRFIA 對乙肝五項進行定量 檢測極 大地彌補了酶標法定性檢測的不足，成為乙型肝炎血清學標志 物現代 臨床檢驗的發展方向，新波公司為此研制了 HBV 的 TRFIA 試劑盒，并獲得國家批準文號，這是一個可喜的成果，它將推動我國乙肝防治工作和進展，同時亦將推動 TRFIA 技術的普遍應用。 TRFIA 在 HBV 感染診斷及免疫力監測方面的定量檢測具有如下優越性：
◇ 極大地提高了檢測的靈敏度
時間分辨熒光免疫定量技術（ TRFIA ）檢測 HbsAg 靈敏度可達 0.2ng/ml, 而酶標（ EIASA ）檢測的靈敏度是 2ng/ml ，極大地提高檢測的靈敏度。因此，在急性乙肝早期能及早檢出 HbsAg ，確證 HBV 感染，縮短窗口期；其次，可發現低濃度 HbsAg 攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對 HBV 包膜蛋白的免疫應答， HbsAg 表達較低，酶標檢測可出現 HbsAg 和 HbsAb 均陰性的情況， TRF 技術則可避免這些情況的發生，為正確判斷病情提供依據。
◇ 能動態觀察療效和監測病情
1 ）定量分析 HBsAg 和 HBsAb 的濃度變化，可預見急性乙肝是否處于恢復期。如 HBsAg 濃度降低， HBsAb 濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復期發展；反之， HBsAg 濃度處于較高水平或上升趨勢，而 HBsAb 一直處于較低水平，則易發展為慢性乙肝或病毒攜帶者。
2 ）定量分析 HBeAg 和 HBeAb 的濃度變化，可反映病情變化和治療效果。定量測定能明確檢測 HBeAg 向 HBeAb 轉換的時期，即表現為 HBeAg 濃度下降和 HbeAb 升高的過程。高濃度的 HBeAg 還可間接提示病毒處于高復制狀態，具有較高的傳染性。高濃度的 HBeAb 一方面提示病情好轉，而在某些時候（如肝功能指標很差）則可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關。
3 ）HBcAb 濃度的高低可反映病毒感染的狀態。高濃度的抗 - Hbc 提示乙肝急性感染，恢復期濃度降低。慢性 乙肝呈抗 - Hbc 持續高濃度。而低濃度的抗 - Hbc 一般為恢復期或既往感染。
4 ）有利于對慢性肝炎活動性或非活動性的判斷。非活動性慢性乙肝各項指標相對穩定，活動性往往呈現進行性變化。
◇ TRFIA 和定量 PCR 技術可互相補充
血清 HBV-DNA 熒光定量 PCR 測定可以直接反映血液中病毒復制狀態，具有很多臨床應用價值，但不能完全反映病毒復制靜息期肝細胞內 HBV 病毒狀態。 HBV-DNA 陰性并不完全代表體內 HBV 已被清除，結合 " 兩對半 " 各項指標更能客觀反映體內 HBV 病毒狀態。
◇ HbsAb 的定量測定能夠對乙肝的預防起到監督作用
HbsAb 的定量測定能夠對抗體是否真正具有 " 中和 "HBV 的免疫力作出正確評價，對乙肝的預防起到監督作用。 HbsAb 的含量在 10mlU/ml 以上病人 ELISA 檢測即可呈陽性結果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而 HBsAb 的含量在 10-100mlU/ml 之間的樣本，定性雖為 " 陽性 " ，但此時機體對 HBV 的免疫力較弱，甚至不能預防 HBV 感染。只有 HbsAb 的含量達到 100mlU/ml 以上時才可確定具有抵抗 HBV 入侵的作用。作定量檢測，可根據 HBsAb 的含量判斷機體對 HBV 的免疫狀態及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預防乙肝方面。
時間分辨除了在乙肝兩 對半項目 上的應用外，在以下項目上也有廣泛的應用：
一、 內分泌科檢查：
甲狀腺系列： Ultra TSH, T3, T4, FT4, TBG, TG
糖尿病系列： Insulin ,C- Peptie
生長激素類： hGH
其它： Cortisol
二、婦產科檢查
FSH, LH, HCG, Prolactin E2, E3, Testo , Prog , SHBG
三、腫瘤科檢查
AFP, CEA, PSA, HTG, β-2 Micro, NSE, PAP, PSA(Free/Total), PSA EQA, CA-50*, CA-125* ,CA-199* ,CA-153* ,CA-724* ,CY-211*
四、 遺傳科 檢查
產前篩查： h AFP ,/ β HCG , PAPPA
新生兒篩查： Neo- TSH, Neo -T4, Neo- IRT, Neo -17 a - OH, Prog , PKU, G6PD
第二部份：時間分辨技術應用在乙肝兩 對半上 的典型效益分析
方案 一 ：以供貨商提供儀器的合作方式（針對月最低用量在 800 人份以上，合作年限不低于 3 年的用戶）：
以每天 50 個標本，每年 360 天計算：
醫院收入（年）：
125 元 / 人份（深圳市衛生局 " 深衛函【 2004 】 272 號 " 已批的收費標準） x 50 人份 / 天 x 360 天 = 225 萬元
試劑成本（年）：
45 元 / 人份（每人份試劑成本） x 50 人份 / 天 x 360 天 = 81 萬元
成本 / 毛收入 =36%
一年的毛利潤： 144 萬元
方案二：院方自購儀器的用戶：
以月用量為每月 8 套乙肝兩對半（ 800 人份 / 月）的量估算：
醫院收入（年）：
12 （ 個 月） x 800 人份 / 月 x125 元 / 人份（深圳市衛生局 " 深衛函【 2004 】 272 號 "
已批的收費標準） = 120 萬元
試劑成本（年）：
12 （ 個 月） x 800 人份 / 月 x45 元 / 人份 = 43.2 萬元
成本 / 毛收入 =36%
一年的毛利潤： 76.8 萬元
3、儀器投資：一套時間分辨熒光免疫檢測系統的報價是： 42 萬元人民幣。
醫院可以在一年內輕松收回儀器投資并創造一定的利潤。