本文將大致回顧小鼠轉基因領域的顯微操作技術，包括CRISPR/Cas9技術，旨在對這類客戶所用的工作流程和術語進行介紹。此外，還針對有用的顯微操作系統配置提供一些建議。
顯微操作技術概述
圖1：CRISPR/Cas9、原核注射和胚胎干細胞移植技術的粗略比較。更多詳情請參閱下文。
小鼠胚胎早期發育階段
圖2：小鼠胚胎早期發育階段示意圖（夜間受精，早上注射。）（來源：http://dev.biologists.org/content/137/6/859）
圖3：原核階段示意圖（透明帶標為紅色）
圖4：囊胚結構示意圖
顯微操作技術
原核注射（PNI）和胚胎干細胞移植（ESI）
不管是否涉及CRISPR（或者TALEN、ZFN（見第4章）），都要使用原核注射/受精卵注射技術或胚胎干細胞注射技術。這兩種技術是成熟的主流技術，在世界范圍內使用：
原核注射
受精后約12小時，出現了一個卵子原核和一個精子原核（圖2）。在原核融合為一體并構成受精卵細胞核之前，將DNA注入原核階段受精卵內的一個原核中，直徑約80-100μm。注射的靶DNA隨機整合到基因組DNA。方向和拷貝數不可預測，即這是一種非靶向技術，快速直接地獲得感興趣的轉基因小鼠概率非常有限。
圖5：PNI。以固定毛細管固定PN階段的小鼠胚胎（左側）。經由毛細管將溶于緩沖液的少量DNA注入其中一個原核（右側）。可看見被注射的原核發生膨脹。圖片以徠卡DIC采集 。
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