桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產

草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒

無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵

1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。

2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9 細胞，將合適大小的兩孔蓋連接在轉瓶的一個側臂，另用一平蓋接在另一側臂（圖 16.9.1）。將一段短管（約 15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器。借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器加固。

3. 將一段長管（30～60 cm）連接至進氣孔，并在末端連接一濾器。用管索加固。另一段管子連接于濾器的另一端，用管索加固。管子末端用鋁箔封好。

4. 將與兩孔裝置相對的側壁上的蓋子旋轉 90° 以松開，高壓滅菌培養瓶 1 h。

5. 將適應了無血清培養液的 Sf 9 細胞（得自步驟 1）接種于經高壓滅菌的培養瓶中。將培養瓶裝至半滿至全滿之間（例如，在 3 L 瓶中裝 1.5～3 L），加入足夠的無血清培養液，使細胞終密度達到 5 × 10⁵～6 × 10⁵ 細胞/ml。

6. 將培養瓶放在 27℃ 培養箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設置在 80 r/min。從進氣 管的末端移去鋁箔，并將它連接到供氣泵。接通栗的電源，使其流量達到 500～700 ml/min。

7. 細胞生長至密度約 1.5 × 10⁵ 細胞/ml。在層流室中將感染復數（MOI）為 1～2 的病毒通過側臂直接加到培養瓶中。

8. 27℃ 將培養瓶置于磁力振蕩器上并通氣。

9. 處理上清得到分泌蛋白或處理細胞得到胞內蛋白。

如果已有足夠的細胞，可以以達到 1.5 × 10⁵ 個細胞/ml 的密度接種培養瓶。