毛細管凝膠電泳儀(CGE)是20世紀80年代后期發展起來的毛細管電泳分離模式。它是將凝膠電泳儀對生物大分子的分離能力與毛細管電泳儀的快速、微量和定量分析相結合,是當今分離度極高的一種分離技術。
一、工作原理:
將聚丙烯酰胺等在毛細管中交聯生成凝膠,以凝膠作為載體進行電泳,凝膠具有多孔性,類似分子篩的作用,樣品分子按大小分離。
二、凝膠類型:
1、無機凝膠:
(1)多孔硅膠。
(2)多孔玻璃。
2、有機凝膠:
(1)聚丙烯酰胺。
(2)瓊脂糖。
三、凝膠柱制備:
CGE的關鍵是凝膠柱的制備,常用聚丙烯酰胺凝膠進行DNA片段分析和測序。測定蛋白質和肽的分子量常用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺電泳(SDS-PAGE)。
將單體丙烯酰胺溶液中的交聯劑N,N′-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)的濃度降為零,得到低粘度線性非交聯的親水性聚合物用作操作溶液,來代替高粘度交聯聚丙烯酰胺,仍有按分子大小分離的作用。無膠篩分柱易制備,使用方便,但分離能力比凝膠柱差。
四、特點:
1、抗對流性好,散熱性好,分離度極高。
2、能有效減小組分擴散,峰形尖銳。
五、應用:
蛋白質和DNA等的荷質比與分子大小無關,CZE分離模式很難分離,采用CGE能獲得良好分離。