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    發布時間:2019-09-30 16:40 原文鏈接: 流式細胞術分離法分離T淋巴細胞和B淋巴細胞

    一、試劑及配制

    1. RPMI-1640培養基:應選購不含酚紅的,使用時加入5%的小牛血清

    2. FITC-抗CD3單克隆抗體:FITC為異硫氰酸熒光素,CD3為T細胞表面特有的蛋白質分子(分化抗原)。

    二、操作方法

    1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離單個核細胞,用RPMI-1640培養基配成1×107 /ml;

    2. 加適量FITC-抗CD3,4℃孵育30min,用RPMI-1640培養基洗2次;

    3. 用流式細胞儀進行分析。在散射光參數圖上選取淋巴細胞群,在熒光參數圖上選取綠色熒光陽性的細胞進行分選。

    三、注意事項

    1. 分選細胞常常用于細胞亞群的進一步的功能研究,因此,整個過程均需要嚴格無菌操作,并且在進行流式細胞儀進行無菌沖洗。

    2. 此法分離得到的T細胞純度可達到99%,收獲率可達到90%。

    3. 由于噴嘴孔很小(約70~100μm),分選前用30~40μm孔徑的濾網過濾細胞懸液,以免稀薄凝塊堵塞噴嘴。


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