一、試劑及配制
1. RPMI-1640培養基:應選購不含酚紅的,使用時加入5%的小牛血清。
2. FITC-抗CD3單克隆抗體:FITC為異硫氰酸熒光素,CD3為T細胞表面特有的蛋白質分子(分化抗原)。
二、操作方法
1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離單個核細胞,用RPMI-1640培養基配成1×107 /ml;
2. 加適量FITC-抗CD3,4℃孵育30min,用RPMI-1640培養基洗2次;
3. 用流式細胞儀進行分析。在散射光參數圖上選取淋巴細胞群,在熒光參數圖上選取綠色熒光陽性的細胞進行分選。
三、注意事項
1. 分選細胞常常用于細胞亞群的進一步的功能研究,因此,整個過程均需要嚴格無菌操作,并且在進行流式細胞儀進行無菌沖洗。
2. 此法分離得到的T細胞純度可達到99%,收獲率可達到90%。
3. 由于噴嘴孔很小(約70~100μm),分選前用30~40μm孔徑的濾網過濾細胞懸液,以免稀薄凝塊堵塞噴嘴。