過氧化氫酶的活性測定——紫外吸收法
【原理】
H2O2在240nm波長下有強烈吸收,過氧化氫酶能分解過氧化氫,使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低.根據測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性.
【儀器與用具】
紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml容量瓶1個；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恒溫水浴；
【試劑】
0.2mol/L pH7.8磷酸緩沖液（內含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）.
【方法】
1.酶液提取：稱取新鮮小麥葉片或其它植物組織0.5g置研缽中,加入2～3ml 4℃下預冷的pH7.0磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿后,轉入25ml容量瓶中,并用緩沖液沖洗研缽數次,合并沖洗液,并定容到刻度.混合均勻將量瓶置5℃冰箱中靜置10min,取上部澄清液在4000rpm下離心15min,上清液即為過氧化氫酶粗提液.5℃下保存備用.
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