液相色譜柱選擇困難？看準這些讓你事半功倍

很多時候，實驗室的小伙伴們都是參照標準來進行實驗，可標準上一句“以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”就足夠讓小伙伴們選擇困難癥犯，更不用說是自己做方法開發的實驗了。的確，色譜是一門實驗學科，沒有誰能在未做實驗的情況下預測出哪一根色譜柱能完成分離任務，尤其是當標準沒有明確推薦色譜柱品牌型號的時候，這也就導致很多小伙伴經常內心OS：C18柱那么多，哪個才能分的Z hao？

別急，雖然我們不能準確地預測實驗結果，但把握基本的色譜柱性能參數還是可以做到的。下面就聽小編細細道來。

01 載碳量

眾所周知，反相C18在當今色譜分離領域依舊承擔著ji大比例的分離任務，就是因為其性質適合大多數化合物的色譜分離，那么在選擇色譜柱的時候，就一定要注意色譜柱本身的適用性，盡可能選擇普適性強，適用面廣的色譜柱，而C18柱的“載碳量”這一參數，就是尤為重要的參數之一。

對于一根普適性強的C18色譜柱，載碳量參數是在10%~20%之間，尤以20%附近z佳（16%-22%），因為這樣比例略高的載碳量，在保證了化合物能有效保留的前提下，活性位點數量減小，出現殘留吸附的情況也會減小。另外，稍高于普通C18的鍵合密度也有助于色譜鍵合相選擇性的提高。

02 硅膠純度

除了特殊情況以外，越是適用性強的填料越要選擇B型硅膠。B型硅膠的硅膠純度＞99.999%，金屬離子含量＜10 ppm，并且孔徑和粒徑分布更加均勻，這樣得到的色譜峰展寬更小，峰形更加對稱。

03 封尾

不同品牌色譜柱的封尾工藝和封尾試劑不一樣，這也是導致都是C18，性質差異卻較大的原因之一。除非標準特殊說明使用未封尾色譜柱，一般情況下，優先選擇使用封尾的色譜柱（End-Capped），尤其是雙封尾色譜柱，進行實驗。

04 比表面積

可能很多小伙伴都會有意無意地忽略掉色譜柱的比表面積這個參數，其實這也是影響色譜柱性能的一個很重要的參數。比表面積的大小，將影響到鍵合相覆蓋率的高低，以及目標物與鍵合相發成相互作用的概率大小。比表面積的大小，還會影響梯度平衡時間的長短。那么，在選擇普適性強的色譜柱的時候，盡可能選擇比表面積在180m2/g~450m2/g的色譜柱，像常見的320m2/g，350m2/g，420m2/g，450m2/g，都是適用面比較廣的。

05 孔徑

孔徑的選擇取決于分子量的大小。一般來說，要求孔徑是分子直徑三倍以上，這樣分子才能順利進入孔中有所保留。以分子量2000為界，分子量＜2000，可以選擇100?、120?、150?等孔徑；分子量＞2000，如多肽，核酸等大分子的分離，可以選擇300?，甚至孔徑更大的色譜填料。

06 色譜柱規格

如果標準上有指定具體的色譜柱規格，那無需多言。但當我們自己在做方法開發的時候，無從得知什么規格最合適，而柱長、內徑、粒徑的不同又會影響到柱效、分離度、保留時間等系統適用性值，選擇的不合適還可能造成色譜柱壓力過高或污染。因此，保險起見，小伙伴們一開始可以選擇4.6×250mm，5μm的色譜填料，這樣5μm粒徑柱壓不會很高，也便于沖洗維護；柱長夠長，多組分樣品也具有一定的分離效率；柱內徑也不至于太小而造成超載。

07特殊基團

特殊基團一般是指為了使得色譜填料具有獨特的特性和不一樣的選擇性，從而在色譜柱的鍵合工藝或封尾工藝過程中，添加的特殊官能團試劑。這些試劑的加入固然有助于分離一些本不易分離的組分，但是，在進行常規實驗，或方法建立初期，不建議選擇添加特殊基團的色譜柱，否則色譜分離的重現性可能在后續的實驗中成為潛在的問題。

怎么樣，通過上述的介紹，小伙伴是不是現在對色譜柱的參數有了更全面的認識了呢，以后在選擇色譜柱的時候也會更有方向感，不會再如“霧里看花”一般不知如何選擇了吧。