淋巴細胞增殖功能的測定實驗

PBMC

閃爍液 RPMI1640 CO2孵箱

細胞收集儀 β液閃儀

1.  無菌從肝素抗凝血中分離外周血單個核細胞（PBMC）洗滌后用10％FCS RPMI1640調整細胞數為1～2x10⁶/ml

　　　　　　
2.  加入96 孔培養板中，1～2x10⁵ 細胞/100 ul/孔，每組設3孔。加入最適劑量PHA，100 ul/孔，同時設不加PHA陰性對照。如觀察細胞因子（如IL-2）或其它刺激物（PMA）對增殖功能的調節作用，則根據加入因子的濃度而確定加入量，一般每孔最終體積為200 ul，37 ℃、5 ％ CO2孵育，66 h

　　　　　　　　
3.  每孔加入0.5～1 uci　3H-TdR（50ul），繼續培養6～12 h

　　　　　　　　　
4.  用DYQ-Ⅱ型多頭細胞收集儀收集樣品于"9999"型玻璃纖維濾紙上

　　　　　　　　　　　　
5.  烤干后β液閃儀計數

　　
6.  計算
 

（1）增殖水平直接用CPM值表示。

（2）也可用刺激指數（SI）表示
 

　　PHA（或實驗組）cpm-機器本底

SI＝───────────────

　　陰性對照組cpm-機器本底

1.  注意無菌操作。

　　
2.  PHA、ConA、PWM、LPS等在正式實驗前均需摸索最適劑量或亞適劑量。廠家和批號不同絲裂原作用常有很大差別，如Wellcome公司PHA終濃度最適劑量為1～3 ug/ml，而廣州醫工所PHA約為20～100 ug/ml。

　　
3.  根據實驗需要，對不同種（人、小鼠、大鼠、兔、狗等）不同來源淋巴細胞（胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃腺、外周血等）均應進行最適細胞濃度、圈養時間和刺激物濃度的摸索。

來源：醫學基礎免疫學實驗指導，主編金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界圖書出版社，1990