實驗方法原理 兩個無關個體功能正常的淋巴細胞在體外混合培養時，由于HLAⅡ類抗原不同，可相互刺激對方的T細胞發生增殖，此外雙向混合淋巴細胞培養（two way MLC）；若將其中一方的淋巴細胞先用絲裂酶C處理或射線照射使之細胞中DNA失去復制能力，但仍能刺激另一方淋巴細胞發生轉化，稱為單向混合淋巴細胞培養（one way MLC）。兩個個體間HLA抗原差異程度越大，反應越強烈，可通過細胞數量、形態檢查或3H-TdR摻入率檢測反應細胞的增殖水平。EB病毒轉化的B淋巴細胞表達高水平的HLAⅡ類抗原，常作為單向混合淋巴細胞培養中的刺激細胞。
實驗材料 刺激細胞N23細胞系
試劑、試劑盒 FCS RPMI 1640培養基
儀器、耗材 細胞培養瓶培養板滴管吸管CO2孵箱超凈臺
實驗步驟
1. 刺激細胞的準備
常用的刺激細胞有EB病毒轉化的B淋巴細胞（如N23細胞）或PBMC。
（1）取處于對數生長期的N23細胞，離心后重懸于新鮮完全培養基中。
（2）調整細胞數為1×106 /ml~2×106 /ml，移置于塑料培養瓶或者50 ml 離心管中。
（3）用60 ℃照射3000 rad。
2. 反應細胞的準備
分離純化待檢個體的PBMC。
3. LC
（1）按2×106PBMC與1×105經3000 rad照射的N23細胞的比例，重懸于4 ml 10%FCSRPMI1640。
（2）放置于小培養瓶中進行MLC，培養瓶保持直立，培養4 d 內不要晃動。
（3）第5 d 加入1 ml 新鮮培養基。
4. 如要測定3H-TdR摻入率，一般可在MLC的第5 d 進行。
5. 如要檢測MLC中NK、LAK或特異性殺傷性T淋巴細胞（CTL），一般在7~10 d 左右收獲效應細胞。
注意事項
1. 注意無菌操作。
2. 刺激細胞接受照射劑量要準確，是細胞暫時存活，但失去增殖的能力。
3. 可用RAJI或Daudi細胞作為刺激細胞，也可將不同的細胞混合作為刺激細胞。
4. 不同刺激細胞與反應細胞的合適比例有所不同，應做預實驗選擇最佳的實驗條件。