該菌能發酵葡萄糖、甘露糖、棉子糖、蔗糖和海藻糖，微發酵果糖和麥芽糖。發酵的主要產物為乙酸和甲酸。不發酵伯膠糖、纖維二糖、赤癬糖、糖原、肌醇、乳糖、松三糖、蜜二糖、鼠李糖、山梨醇和木糖等。能水解七葉苷，不水解淀粉，不產生亞硝酸鹽，對牛乳無變化，不液化明膠，不消化酪蛋白。
本菌營養需要豐富，要求嚴格厭氧。其最適培養基首選為含0.2%葡萄糖、8%無菌馬血漿和0.5%酵母抽提物的色氨酸磷酸瓊脂或胰蛋白示磷酸鹽瓊脂；最適pH值為7.2；最適生長溫度為35～42℃。
本菌能形成芽胞，因此對外界環境有很強的抵抗力。芽胞對辛酰及氯仿具有較強抵抗力。其卵黃培養物在-20℃活16年，70℃能存活3h，80℃1h，而在100℃時僅能存活3min。腸梭菌在厭氧條件下培養的純培養物具有極高的致病性。