如果不是很明顯的話,是可以用的,但是很明顯,就要重新設計實驗
一般的主峰前面出峰的話,是引物二聚體,而如果主峰后面出峰的話,一般的是非特異性的大片段的擴增。如果主峰相對強于次峰,可以通過改變引物濃度,退火溫度和鎂離子濃度來解決,但如果次峰強于主峰,就是說雜帶的特異性高于目的條帶,一般的只能換引物了。
擴展資料
一、定義
熔解曲線(Melting curve)是指隨溫度升高DNA的雙螺旋結構降解程度的曲線。熔解曲線分析可以用來確定不同的反應產物,包括非特異性產物。
二、原理
擴增反應完成后,通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光信號來產生熔解曲線,熔解溫度上有一特征峰(Tm,DNA雙鏈解鏈50%的溫度),用這個特征峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開,因為它們在不同的溫度熔解線。隨著反應中雙鏈DNA變性,熒光染料又恢復到游離狀態導致熒光信號降低,用熒光信號改變與溫度作圖。在擴增產物的只有染料法才需要做熔解曲線,探針法沒有必要,因為熔解曲線是由于染料法的特異性差,所以通過熔解曲線考察擴增產物是否是目標產物,與電泳的其中的一個目的相同,但熔解曲線畢竟是數學推導,并且結果中包含了儀器的誤差。