(1) 比色法: ① Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH測定方法是30℃的連續監測法,以國際單位(U/L)計算。上述方法是37℃比色法,為使各方法間結果有更好的可比性,可轉換成30℃連續監測法的相應單位。37℃轉換成30℃溫度系數為0.87。 ② 因紅細胞內該酶活性高,應在2h內及時分離血清,標本不能溶血。4℃酶活性穩定不少于7天。 ③ 可用EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)抗凝血漿,草酸鹽、枸櫞酸鈉、氟化物抗凝劑可抑制該酶活性。 (2) 連續監測法: ① 此法是1980年由英國臨床化學協會(ACB)推薦,其最適底物濃度為15mmol/L(25℃),反應混合物的最終濃度:磷酸鹽65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L,樣品容積組分比0.023。改為37℃測定結果與LDH相關性較好。 ② α-酮丁酸鈉較穩定,α-酮丁酸長期存放,其縮合物可抑制酶促反應。 ③ 國內商品試劑盒的方法,一般是在操作前將α-酮丁酸與NADH溶液混合,置反應溫度條件下數分鐘后,作為單一試劑取出一定量加入樣品中,延遲時間30s后,監測3min。