競爭酶標抗體法測定抗體，可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌后加入受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，孵育后酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌后加底物顯色，參考管中由于結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淺，表示標本中抗原含量越多。