糖化血清蛋白測定實驗

一、實驗試劑：

1、0.1mmol/L碳酸鹽緩沖液，PH10.8：無水碳酸鈉9.54g，碳酸氫鈉0.84g，    溶于蒸餾水并稀釋至1000ml。

2、0.11mol/L  NBT試劑：稱取氯化硝基氮唑藍100mg，用于上述緩沖液溶解并稀釋至1000mL．置冰箱保存，至少可穩定3個月；

3、4mmol/L DMF標準液：稱取DMF99.6g，熔于40g/L牛血清白蛋白溶液100ml中．

二、實驗操作：

測定管加待檢血清（血漿）0.1ml，空白管加蒸餾水0.1ml，各加37℃預溫的NBT試劑4ml，混勻，置37℃水浴準確15min，立即取出，流水冷卻（低于25℃），冷卻后15分鐘內分光光度計波長550nm，10nm光徑比色杯以空白管調零，讀取測定管．從標準曲線查得結果，以果糖胺mmol/L報告。

標準曲線制備：

取4mmol/L  DMF標準液用牛血清蛋白溶液（40g/L）稀釋成1、2、3、4mmol／L，并以血清蛋白，40g/L與測定管同樣操作，讀取各濃度DMF相應的吸光度，以DMF濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制成標準曲線。濃度在4mmol/L以內與吸光度呈線性關系．

參考值：1.9十0.25mmol/L

1、PH值、反應溫度，反應時間對本實驗影響較大，必須嚴格控制．

2、血清蛋白經非酶促糖化反應可形成酮胺結構。DMF在適當的PH值及溫度條件下，經過結構重排可由氧環式結構形成1－脫氧－氨基－2－酮基的酮胺結構，因此用它作為標準參照物是合理的．以mmol/L報告結果較為理想．

3、固定值凍于精化血紅蛋白做標準，測定結果更穩定，因為不同的標準物時所測得結果不完全一致，最好建立實驗室的參考值。