線粒體的活體染色及電鏡照片觀察

實驗原理

線粒體是細胞內一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠B 是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態呈藍綠色，而在周圍的細胞質中染料被還原，成為無色狀態。

實驗試劑

1. l／300 詹納斯綠B 染液

2. Ringer 氏液(哺乳類用)

實驗設備

1. 顯微鏡

2. 手術器材一套

3. 解剖盤

4. 小平皿

5. 載片

6. 蓋片

7. 吸水紙

8. 10ml注射器

9. 吸管

實驗材料

兔子一只、線粒體的電鏡照片。

實驗步驟

1. 兔肝細胞線粒體的活體染色

1) 用空氣栓塞處死兔子，置于解剖盤內，迅速打開腹腔。

2) 取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer 氏液的平皿內洗去血液(用鑷子輕壓)，用吸管吸去Ringer 氏液，在平皿內加1／300 詹納斯綠B 染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細胞內線粒體的酶系可進行充分的氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態，使線粒體著色。當組織塊邊緣染成籃色時即可，一般需要染30 分鐘。

3) 染色后，將組織塊移到載片上，用鑷子將組織塊拉碎，就會有一些細胞或細胞群從組織塊脫離。將稍大的組織塊去掉，使游離的細胞或細胞群留在載片上，加一滴Ringer 氏液，蓋上蓋片，吸去多余水分。

2. 結果

1) 顯微鏡觀察，肝細胞質中許多線粒體被染成藍綠色，呈顆粒狀。

2) 線粒體的光鏡切片觀察

用詹納斯綠B 染色的兔肝細胞光鏡切片，肝細胞中的線粒體呈藍綠色的顆粒。

3) 線粒體的電鏡照片觀察

不同細胞中線粒體的形態和數目不同。線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數目與細胞類型和細胞的生理狀態有關，線粒體多聚集在細胞生理功能旺盛的區域。線粒體脊的數目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長軸垂直排列，但也可見到與線粒體長軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數量與細胞呼吸機能的強度有很大關系。