細胞凝集反應

實驗概要

       1、觀察血細胞的凝集現象。
       2、掌握凝集素促使細胞凝集的原理。

實驗原理

 細胞質膜是由蛋白質不同程度鑲嵌在脂雙層中所形成的動態流動結構，蛋白質和脂類分子又與寡糖鏈結合為糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至細胞表面的分枝狀寡糖鏈在質膜表面形成細胞外被（又稱為糖萼）。許多研究結果表明：細胞間的分子識別、細胞的生長和分化、免疫反應和腫瘤發生等均與細胞外被（分枝狀寡糖鏈）有關。

         凝集素（lectin）是一類含糖的（少數凝集素例外）并能與糖進行專一性結合的蛋白質，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作用。凝集素促使細胞凝集主要是由于它能與細胞外被的糖分子相連接、在細胞間形成“橋”的結果，加入與凝集素互補的糖分子可以抑制細胞間的凝集反應。

主要試劑

1. PBS緩沖液：稱取NaCl 7.2g、Na₂HP0₄ 1.48g、KH₂P0₄ 0.43g、加蒸餾水，定容至l000 mL中，調pH值到7.2。

2. 1%肝素溶液：稱取肝素鈉0.1g，定容至l0 mL生理鹽水中即可。

主要設備

 顯微鏡、托盤天平、載玻片若干、5mL注射器、滴管2支、離心管2支。

實驗材料

 1. 土豆塊莖。

 2. 2% 紅細胞懸液 

        以無菌方法抽取兔子耳緣靜脈血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸潤）1mL，用生理鹽水洗5次，每次3000 r/min，離心5 min，最后按沉淀壓積的紅細胞體積用生理鹽水配成2％紅細胞懸液。

實驗步驟

1. 稱取土豆去皮塊莖2g，切成小塊
2. 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素）
3. 載玻片上滴一滴土豆凝集素 
4. 再滴一滴2％紅細胞液，充分混勻 
5. 靜置20 min 
6. 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現象 
7. 以PBS液加2％血細胞懸液作為對照實驗，低倍顯微鏡下觀察。