細胞培養中血清的解凍及熱滅活

  細胞培養用血清解凍與熱滅活常見問題 
一、保存血清的方法
    建議血清應保存在-5 ℃至-20 ℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。 
二、如何解凍血清才不會使產品質量受損?
    建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8 ℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。 

三、血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?

    血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。

    若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400 g 稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

四、為什么要熱滅活血清?

    加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究，培養ES 細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

五、有必要做熱滅活嗎?

    實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節省您寶貴的時間，更確保血清的質量!

六、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?

    胎牛血清沒有預老化，儲存在2-8 ℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20 ℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。

七、如何避免沉淀物的產生?

    建議您在使用血清的時候，注意下列的操作：

    解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法(-20 ℃至4 ℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20 ℃至37 ℃)，實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。